微生態(tài)凈水劑對(duì)鯉血液生理生化指標(biāo)的影響

cjlittlepig

摘自《水生態(tài)雜志》

摘要：實(shí)驗(yàn)研究了微生態(tài)凈水劑對(duì)鯉血液生理指標(biāo)和生化指標(biāo)的影響。施加微生態(tài)凈水劑65ｄ后，顯著降低了鯉紅細(xì)胞的滲透脆性，使紅細(xì)胞數(shù)由112.60萬個(gè)／ｍｍ３ 顯著增加到122.40萬個(gè)／ｍｍ３（Ｐ＜0.05）；血紅蛋白由4.60ｇ／100ｍＬ極顯著增加到6.90ｇ／100ｍＬ（Ｐ＜0.01）；紅細(xì)胞壓積由35.2％顯著增加到39.2％（Ｐ<0.05）；血清中TP、ALB、GLO、白球比的含量無明顯變化；血清中GLU、ALP分別較對(duì)照組提高了221％（Ｐ＜0.01）、51％（Ｐ＜0.05）；血清中ACP、GPT分別較對(duì)照組降低了14％（Ｐ＞0.05）、24％（Ｐ＜0.05）。微生態(tài)凈水劑能優(yōu)化鯉的抗應(yīng)激指標(biāo)，提高魚體防御功能，增強(qiáng)抵抗疾病的能力。

關(guān)鍵詞：微生態(tài)凈水劑；鯉；血液；生理指標(biāo)；生化指標(biāo)

cjlittlepig

    隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，未經(jīng)處理的養(yǎng)殖廢水、工業(yè)和生活污水的任意排放，使天然水域受到污染，養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境惡化，導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物的病害問題日趨嚴(yán)重。為了保護(hù)生態(tài)環(huán)境和人類健康，我國開始將微生態(tài)制劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中。微生態(tài)凈水劑是由光合細(xì)菌、乳酸菌、節(jié)桿菌、硝化細(xì)菌等微生物復(fù)合培養(yǎng)而成的，該制劑無毒、無副作用，不產(chǎn)生耐藥性，能有效改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，增強(qiáng)動(dòng)物的抗病能力，減少病害的發(fā)生，是一項(xiàng)有利于水產(chǎn)養(yǎng)殖健康的新技術(shù)（陳文忠等，2004；瑞君和魏銀萍，2005；官瓊等，2005）。目前，微生態(tài)凈水劑在整個(gè)水產(chǎn)養(yǎng)殖中大多數(shù)是直接作用于水體。李卓佳等（2005）報(bào)道了微生態(tài)凈水劑能抑制病原微生物和有害物質(zhì)，調(diào)節(jié)生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中的正常菌群和有益藻類的生長；關(guān)于微生態(tài)凈水劑對(duì)魚類血液生理生化指標(biāo)影響的研究尚無報(bào)道。本文通過在鯉養(yǎng)殖水體潑灑一定濃度的微生態(tài)凈水劑，了解其對(duì)鯉血液生理生化指標(biāo)的影響，為改善魚的體質(zhì)，實(shí)現(xiàn)綠色無公害養(yǎng)殖提供一定的理論依據(jù)。

cjlittlepig

1材料和方法
1.1實(shí)驗(yàn)材料
    鯉材料魚采自天津市寧河縣海天養(yǎng)殖場(chǎng)，試驗(yàn)于2007年４月中旬開始。實(shí)驗(yàn)魚為雜交鯉平均體長（20.1±4.5）ｃｍ，平均體重（92.75±16.01）ｇ。采用除氯自來水，溫度（11.2±1.9）℃，試驗(yàn)前至少在室內(nèi)馴養(yǎng)5ｄ，試驗(yàn)前1ｄ不投喂，隨機(jī)選取個(gè)體差異不大、健康活潑的鯉用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為２個(gè)實(shí)驗(yàn)組和２個(gè)對(duì)照組，各組分別采用1000ｍ３的圓形水泥水槽中，每組隨機(jī)放養(yǎng)鯉120尾。
    微生態(tài)凈水劑購自廈門利洋水產(chǎn)品有限公司，含有光合細(xì)菌、枯草芽孢桿菌、硝化細(xì)菌、節(jié)桿菌，含菌量為10×10９個(gè)／ml。
1.2飼養(yǎng)管理
    實(shí)驗(yàn)用充氣泵充氧，使溶解氧保持在5.0mg／Ｌ以上，每天監(jiān)測(cè)水溫、溶氧、pＨ值。每3ｄ天測(cè)定水質(zhì)（ＮＯ３－Ｎ、ＮＯ２－Ｎ、ＮＨ４＋ －Ｎ），每5ｄ加水質(zhì)凈化劑30ml／ｍ３，每隔15ｄ換１次水（換水30％ ～50％）。投餌率２％ ～３％，以30min吃完為限，每天早、中、晚各投喂１次，并及時(shí)清除殘餌；實(shí)驗(yàn)期為65ｄ。
1.3方法
1.3.1血樣制備　
    實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，鯉饑餓１d，在同一時(shí)間采其血液樣品，用１％肝素鈉處理的注射器，從尾動(dòng)靜脈取血，一部分直接加入5.0ｍＬ離心管中，４℃靜置２ｈ，2500ｒ／min、４℃離心25min，以制備血清，用于各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定；另一部分用１％的肝素鈉抗凝，以制備抗凝血用于各項(xiàng)生理指標(biāo)的測(cè)定。
1.3.2生理指標(biāo)及測(cè)定方法　
    紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）用常規(guī)計(jì)數(shù)法；血紅蛋白含量（Hb）用沙利氏比色法；紅細(xì)胞壓積（HCT）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）采用Westergren法。
    血沉方程Ｋ值＝－ＥＳＲ／［lnＨＣＴ＋（１－ＨＣＴ）］
    ＶＩ＝ＨＣＴ×２．３/（ＲＢＣ×２０）
    ＣＩ＝Ｈｂ×６．９/（ＲＢＣ×２０）
    ＳＩ＝Ｈｂ×６．９/（ＨＣＴ×2.3）
    平均紅細(xì)胞體積（ＭＣＶ）＝ＨＣＴ×１０/ＲＢＣ
    平均紅細(xì)胞血紅蛋白（ＭＣＨ）＝Ｈｂ/ＲＢＣ
    平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（ＭＣＨＣ）＝Ｈｂ×１０/ＨＣＴ
    紅細(xì)胞滲透脆性采用漢伯格－里比拉方法測(cè)定（桂遠(yuǎn)明，２００４）
1.3.3生化指標(biāo)及測(cè)定　
    所有生化指標(biāo)在Microlab300半自動(dòng)生化分析儀上完成。血液生化指標(biāo)測(cè)定方法見參考周玉等（2002）報(bào)道，在24ｈ內(nèi)完成測(cè)定；得到的血清立即進(jìn)行血糖指標(biāo)的測(cè)定。
1.3.4水質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定方法　
    ＮＨ４＋－Ｎ采用奈氏試劑法測(cè)定；ＮＯ２－Ｎ采用重氮－偶氮比色法測(cè)定；ＮＯ３－Ｎ采用鋅鎘還原－重氮偶氮法即鎘柱還原法（雷衍之等，２００６）。
1.4數(shù)據(jù)處理
    所有數(shù)據(jù)均為２０個(gè)樣品的平均值，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Ｍ±ＳＤ）的形式表示。由SPSS13.0程序包進(jìn)行生物學(xué)統(tǒng)計(jì)，用ｔ檢驗(yàn)使用微生態(tài)凈水劑前后各指標(biāo)變化的顯著性。

cjlittlepig

2結(jié)果與分析
2.1微生態(tài)凈水劑對(duì)養(yǎng)殖水質(zhì)的影響
    由圖１可見，養(yǎng)殖水體的氨氮隨著時(shí)間的推移呈現(xiàn)先上升、后下降、再上升的趨勢(shì)，但微生態(tài)凈水劑組氨氮的上升的幅度明顯較低，下降的幅度明顯較高且持續(xù)的時(shí)間很長。由此可見，水質(zhì)凈化劑具有降低氨氮的作用，隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長，凈水效果更加明顯。
2.2血液生理指標(biāo)
    由表１可見，添加微生態(tài)凈水劑的實(shí)驗(yàn)組能優(yōu)化鯉的血液學(xué)指標(biāo)，特別是紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積以及血沉、平均紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度均較對(duì)照組顯著增加（Ｐ＜0.05）；其中，血紅蛋白含量、血沉方程、平均紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白較對(duì)照組極顯著增加（Ｐ＜0.01）；白細(xì)胞數(shù)試驗(yàn)組較對(duì)照組差異不顯著（Ｐ＞0.05）。
    從圖２可以看出，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組的滲透脆性曲線左移，紅細(xì)胞滲透脆性減少，當(dāng)NaCl濃度達(dá)到0.43％時(shí)，對(duì)照組的溶血率就已經(jīng)達(dá)到了100％，說明微生態(tài)凈水劑能提高鯉紅細(xì)胞對(duì)低滲鹽溶液的抵抗能力，表明微生態(tài)凈水劑組的鯉紅細(xì)胞的剛性較強(qiáng)。
2.3血液生化指標(biāo)
    從表２可以看出，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，血清中TP、ALB、GLO、白球比的含量無明顯變化，TG、γ球蛋白、GLU分別較對(duì)照組提高了354％（Ｐ＜0.01）、78％（Ｐ＜0.05）、221％（Ｐ＜0.01），ALP提高了51％（Ｐ＜0.05），ACP活性和GPT活性分別較對(duì)照組降低了14％（Ｐ＞0.05）、24％（Ｐ＜0.05）。

cjlittlepig

3討論
3.1微生態(tài)凈水劑對(duì)鯉生理指標(biāo)的影響
    血液生理指標(biāo)在一定程度上反映出養(yǎng)殖對(duì)象的營養(yǎng)和機(jī)能狀態(tài)。尾崎久雄（1982）研究發(fā)現(xiàn)，魚類在餌料不充足、水質(zhì)條件惡劣的情況下，紅細(xì)胞數(shù)目和血紅蛋白含量將下降。本研究結(jié)果表明，微生態(tài)凈水劑處理后，魚類的紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、血細(xì)胞比容明顯高于對(duì)照組，這與伍莉和陳鵬飛（2006）的研究結(jié)果一致。魚類紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白和血細(xì)胞比容指標(biāo)的上升反映了血液輸氧能力的升高，當(dāng)環(huán)境條件改變時(shí)，導(dǎo)致魚體需氧量減少，進(jìn)而使代謝水平降低，但微生態(tài)凈水劑組魚類會(huì)適應(yīng)此環(huán)境條件的改變，說明微生態(tài)凈水劑能夠提高鯉的應(yīng)激能力。引起血細(xì)胞全部溶血的NaCl濃度即為紅細(xì)胞最大抵抗值，用紅細(xì)胞滲透脆性表示（桂遠(yuǎn)明，2004）。微生態(tài)凈水劑對(duì)鯉紅細(xì)胞的溶血率極顯著降低，使?jié)B透曲線左移，說明施加微生態(tài)凈水劑可以使鯉紅細(xì)胞的剛性增強(qiáng)，增加其對(duì)外界低滲鹽溶液的抵抗能力，有利于提高鯉對(duì)外界水環(huán)境改變的適應(yīng)性。
3.2微生態(tài)凈水劑對(duì)鯉生化指標(biāo)的影響
    動(dòng)物血液的生化參數(shù)是動(dòng)物機(jī)體健康狀況的主要指標(biāo)，也是疾病診斷的依據(jù)之一。魚類血液中的生化指標(biāo)在正常情況下比較穩(wěn)定（周玉等，2002）。但是當(dāng)魚體生長環(huán)境改變或發(fā)生病變時(shí)，許多生化指標(biāo)會(huì)發(fā)生明顯改變，并以此判斷魚體的生理變化，用于魚類疾病的診斷和環(huán)境監(jiān)測(cè)。當(dāng)肝臟、心肌病變，細(xì)胞壞死或通透性增加時(shí)，酶即釋放于血清中，某些生化指標(biāo)的活性便會(huì)升高。因此，動(dòng)物血清的生化指標(biāo)是動(dòng)物機(jī)體健康狀況的主要指標(biāo)，也是其疾病診斷和測(cè)定的依據(jù)之一（劉志強(qiáng)等，1999）。
    本實(shí)驗(yàn)中，微生態(tài)凈水劑組的ACP、GPT的活性明顯低于對(duì)照組，說明微生態(tài)凈水劑可以促進(jìn)養(yǎng)殖魚類的健康生長，提高魚體的免疫能力，增強(qiáng)養(yǎng)殖魚類的抗病力，這與翟秀梅等（2007）的研究結(jié)果一致。微生態(tài)凈水劑促進(jìn)養(yǎng)殖魚類的健康，可能是其能改善養(yǎng)殖水體的水質(zhì)，起到加強(qiáng)有機(jī)物的降解、提高水體自凈能力的作用；水體環(huán)境得到改善，則可以間接地促進(jìn)養(yǎng)殖魚類的健康。本次實(shí)驗(yàn)，微生態(tài)凈水劑使鯉血清中轉(zhuǎn)氨酶活性降低，可能是其通過鰓組織滲透進(jìn)入血液循環(huán)，在肝臟中參與脂肪代謝，降低了脂肪的含量，避免了脂肪肝的發(fā)生，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。90％以上的血清總蛋白和白蛋白是肝臟合成的，因此，其檢測(cè)數(shù)據(jù)是反映肝臟功能的重要指標(biāo)。微生態(tài)凈水劑組總蛋白和白蛋白高于對(duì)照組，說明其對(duì)肝臟蛋白質(zhì)的合成有良好的促進(jìn)作用。堿性磷酸酶不僅與磷代謝密切相關(guān)，而且是重要的解毒體系。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微生態(tài)凈水劑組血清中堿性磷酸酶的活性明顯高于對(duì)照組，進(jìn)一步說明施加微生態(tài)凈水劑能夠提高魚體的解毒能力。施加微生態(tài)凈水劑后，鯉的血液生理和生化得到了優(yōu)化，提高了魚體的應(yīng)激能力，表明了微生態(tài)凈水劑具有安全性和有效性，在水產(chǎn)行業(yè)將有良好的發(fā)展前景。