酵母培養(yǎng)物對(duì)草魚生長(zhǎng)性能與腸道粘膜形態(tài)的影響

cjlittlepig

摘自《飼料工業(yè)》

摘要：為了研究酵母培養(yǎng)物（yeast culture）對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響，選取初均重（69.51±6.29）g的草魚144 尾，隨機(jī)分為3 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16 尾魚，分別飼喂基礎(chǔ)飼料和添加1 000 mg/kg、2 000 mg/kg 酵母培養(yǎng)物的試驗(yàn)飼料，經(jīng)過(guò)70 d 的池塘網(wǎng)箱養(yǎng)殖試驗(yàn)，結(jié)果顯示：①與基礎(chǔ)飼料對(duì)照組相比，添加酵母培養(yǎng)物能夠提高草魚的特定生長(zhǎng)率（SGR），降低飼料系數(shù)（FCR），其中1 000 mg/kg 組與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。②與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組腸道皺襞高度均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），粘膜層厚度與皺襞高度表現(xiàn)一致（P<0.05）；微絨毛高度、寬度均高于對(duì)照組，其中1 000 mg/kg 組微絨毛高度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），微絨毛密度均高于對(duì)照組，其中2 000 mg/kg 組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。以上結(jié)果表明：酵母培養(yǎng)物能夠通過(guò)改善草魚腸道粘膜形態(tài)，促進(jìn)草魚對(duì)飼料的吸收利用，從而促進(jìn)草魚生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：酵母培養(yǎng)物；草魚；生長(zhǎng)性能；腸道粘膜

    酵母培養(yǎng)物（yeast culture，簡(jiǎn)稱YC）通常指用固體或液體培養(yǎng)基經(jīng)酵母菌發(fā)酵的培養(yǎng)物和酵母菌的混合物，含有維生素、礦物質(zhì)、消化酶、促生長(zhǎng)因子、有機(jī)酸、寡糖、增味物質(zhì)和較豐富的氨基酸等，營(yíng)養(yǎng)十分豐富，是集營(yíng)養(yǎng)和保健為一體的飼料添加劑，是生物技術(shù)和微生態(tài)技術(shù)在飼料添加劑中的研究成果之一，具有無(wú)殘留、無(wú)污染和無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為目前研究的熱點(diǎn)。本試驗(yàn)通過(guò)在草魚基礎(chǔ)飼料中添加不同濃度的酵母培養(yǎng)物，旨在探討酵母培養(yǎng)物對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響，為其在草魚飼料中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

    酵母培養(yǎng)物由達(dá)農(nóng)威生物發(fā)酵工程技術(shù)（深圳）有限公司提供，有效成分是酵母細(xì)胞外代謝產(chǎn)物。草魚，由無(wú)錫宜興養(yǎng)殖廠提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧組成

    試驗(yàn)選取初均重（69.51±6.29）g 的草魚144 尾，隨機(jī)分為3 組，以基礎(chǔ)飼料作為對(duì)照組；在基礎(chǔ)飼料中分別添加1 000、2 000 mg/kg 的酵母培養(yǎng)物作為2個(gè)試驗(yàn)組，共3 個(gè)組。每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16 尾魚，基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。飼料原料經(jīng)微粉碎后過(guò)40 目篩，混合均勻后用小型顆粒飼料機(jī)加工成直徑1.5 mm 的顆粒飼料備用，飼料加工過(guò)程中溫度65～70 ℃，持續(xù)時(shí)間約1 min。

1.3 飼養(yǎng)管理

    在50 畝的池塘中設(shè)置網(wǎng)箱進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)，網(wǎng)箱規(guī)格為1 m×1 m×1.5 m，本試驗(yàn)共15 個(gè)網(wǎng)箱。試驗(yàn)魚經(jīng)過(guò)2 周的養(yǎng)殖馴化后再進(jìn)行分組。飼料投喂每天3次，投喂量為體重的2%～3%。試驗(yàn)時(shí)間為2008 年8月至10 月，飼養(yǎng)期間水質(zhì)條件為：水溫（28.0±3.0）℃、DO＞8.0 mg/l、pH 值＜8.3、亞硝酸鹽＜0.01 mg/l、硫化物＜0.05 mg/l。正式養(yǎng)殖試驗(yàn)70 d。

1.4 樣品采集和分析

    飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h 后測(cè)定每箱魚的總體重和尾數(shù)，計(jì)算成活率、飼料系數(shù)、特定生長(zhǎng)率。解剖試驗(yàn)魚，取出內(nèi)臟團(tuán)，分離出腸道，剔除表面脂肪組織，分別取中腸1 cm 左右大小的組織1~2 塊，縱向剖開，使腸粘膜暴露于空氣中，用生理鹽水沖洗3~4 次，除去其上所帶有的血液、糞便等雜質(zhì)，制得腸道樣品。掃描電鏡腸道樣品置于4%戊二醛固定液中，超聲波洗滌10 min，更換固定液再次洗滌，更換固定液保存。制樣時(shí)將其取出，洗滌，適當(dāng)修剪， 1%鋨酸固定1 h，0.1 M pH 值7.2 磷酸緩沖液洗3 次，叔丁醇系列梯度脫水，真空干燥，噴金，S-4700 型冷場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡觀察、拍照。

    組織切片腸道樣品置于4%中性甲醛中固定、70%乙醇保存。分別經(jīng)濃度為70%、80%、90%、95%以及100%的酒精梯度脫水，并置于二甲苯中透明，最后包埋于低熔點(diǎn)石蠟中。使用KD-2508 型切片機(jī)橫向連續(xù)切片，厚度為8 μm，而后展片于清潔的載玻片上。采用H.E 染色，中性樹膠封片。顯微測(cè)量腸道皺襞高度、寬度，粘膜層、肌層、漿膜層厚度，光學(xué)顯微鏡下觀察并采用Nikon COOLPIX4500 型相機(jī)進(jìn)行拍照。

1.5 計(jì)算公式

成活率（SR，%）＝（試驗(yàn)?zāi)�魚尾數(shù)/試驗(yàn)初魚尾數(shù)）×100；

特定生長(zhǎng)率（SGR，%/d）＝（ln 末均重－ln 初均重）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

飼料系數(shù)（FCR）＝每箱投喂飼料總量/每箱魚體總增重量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示, 結(jié)果采用Excel和SPSS14.0 版統(tǒng)計(jì)軟件中One-Way Anova 過(guò)程進(jìn)行方差分析, 并進(jìn)行Duncan's 法多重比較, 顯著水平為0.05。

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2 結(jié)果
2.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響
    經(jīng)過(guò)70 d 的池塘網(wǎng)箱養(yǎng)殖試驗(yàn)，各組試驗(yàn)草魚的特定生長(zhǎng)率和飼料系數(shù)結(jié)果見表2。各試驗(yàn)組成活率均為100%，對(duì)照組為98%。在特定生長(zhǎng)率方面：與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組的特定生長(zhǎng)率增加，分別增加了28.72%、4.26%。其中，酵母培養(yǎng)物為1 000 mg/kg組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。在飼料系數(shù)方面：與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組飼料系數(shù)分別下降了33.76%、10.55%，其中1 000 mg/kg 組飼料系數(shù)顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。
2.2 酵母培養(yǎng)物對(duì)草魚腸道粘膜形態(tài)的影響
2.2.1 腸道皺襞觀察及測(cè)量
    各組草魚腸道皺襞測(cè)量結(jié)果見表3，各試驗(yàn)組皺襞高度均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），粘膜層厚度與皺襞高度表現(xiàn)一致（P<0.05）。各試驗(yàn)組皺襞寬度、肌層厚度、漿膜層厚度均與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。
2.2.2 腸道微絨毛觀察及測(cè)量
    腸道微絨毛觀察結(jié)果見表4，各試驗(yàn)組微絨毛高度均高于對(duì)照組，其中1 000 mg/kg 組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。各試驗(yàn)組微絨毛寬度均高于對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05），微絨毛密度均高于對(duì)照組，其中2 000 mg/kg 組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

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3 討論
     本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組特定生長(zhǎng)率比對(duì)照組分別增加了28.72%、4.26%，飼料系數(shù)與對(duì)照組相比，下降了10%以上，其中1 000 mg/kg 組下降了33.76%。此結(jié)果表明，酵母培養(yǎng)物在一定范圍內(nèi)可有效促進(jìn)草魚的生長(zhǎng)，降低飼料系數(shù)，且酵母培養(yǎng)物1 000 mg/kg 組生長(zhǎng)效果最好。此結(jié)果可能由于酵母培養(yǎng)物中甘露寡糖成分促進(jìn)了腸道中雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌的生長(zhǎng)，阻止了致病菌的入侵，維持了腸道菌群的平衡，并且改善了腸道粘膜形態(tài)；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)成分為草魚生長(zhǎng)提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，參與機(jī)體代謝，還有各種未知生長(zhǎng)因子共同作用，從而促進(jìn)草魚的生長(zhǎng)。這與劉哲等研究酵母培養(yǎng)物（YC）添加量為5%時(shí)，明顯促進(jìn)了建鯉生長(zhǎng)的結(jié)果；吳新民等在對(duì)蝦飼料中添加活性酵母可提高飼料利用率的結(jié)果一致。

    YC 對(duì)粘膜的保護(hù)作用可能部分與酵母細(xì)胞壁有關(guān)。而酵母細(xì)胞壁甘露寡糖不經(jīng)消化直接到達(dá)后腸促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌增殖，并且與病原菌在腸壁上的受體非常相似，可吸附病原菌，減少了絨毛與抗原的結(jié)合機(jī)會(huì)，改善腸道微生物區(qū)系，進(jìn)而影響腸道形態(tài)。Zhang 等證實(shí)，酵母細(xì)胞壁改善了肉仔雞的腸粘膜形態(tài)。有報(bào)道YC 對(duì)家禽粘膜形態(tài)也有影響家禽日糧中添加酵母細(xì)胞或酵母細(xì)胞壁，能提高絨毛高度和絨毛高度與隱窩深度比[6]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各試驗(yàn)組皺襞高度均顯著高于對(duì)照組，各試驗(yàn)組肌層厚度均高于對(duì)照組，消化管壁肌肉的厚度決定食糜的機(jī)械消化速率。這與劉觀忠報(bào)道的YC 增加了腸壁厚度的結(jié)果一致。各試驗(yàn)組微絨毛高度均高于對(duì)照組，其中1 000 mg/kg 組顯著高于對(duì)照組。各試驗(yàn)組微絨毛寬度、密度均高于對(duì)照組。此結(jié)果表明，基礎(chǔ)飼料中添加1 000 mg/kg 酵母培養(yǎng)物能夠促進(jìn)草魚腸道皺襞、微絨毛發(fā)育、生長(zhǎng)，從而使腸粘膜形態(tài)得到改善，且與提高其平均日增重和降低飼料系數(shù)的試驗(yàn)結(jié)果相一致。可能是因?yàn)閅C 到達(dá)消化道內(nèi)能分泌并活化大量蛋白酶，促進(jìn)飼料蛋白的降解；也可能是酵母細(xì)胞壁某些成分促進(jìn)了消化道的發(fā)育，改善了腸道內(nèi)環(huán)境。劉觀忠等研究發(fā)現(xiàn)酵母培養(yǎng)物具有改善雛雞腸壁結(jié)構(gòu)的效果。李順等發(fā)現(xiàn)，活性酵母可替代抗生素，有促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)和降低腹瀉的作用，并可改善小腸上皮組織結(jié)構(gòu)。胡友軍等研究發(fā)現(xiàn)，添加活性酵母顯著提高了仔豬腸道絨毛高度，一定程度上克服了斷奶應(yīng)激對(duì)腸道造成的損傷，這些與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。關(guān)于酵母對(duì)腸道的保護(hù)作用的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

    有報(bào)道隨著活酵母飼料添加水平的升高，肉仔雞生長(zhǎng)速度和飼料利用率有隨之減少的趨勢(shì)，當(dāng)YC 添加水平達(dá)到0.9%時(shí)反而對(duì)肉雞生長(zhǎng)有抑制作用，劉觀忠也有類似報(bào)道。本文研究的添加2 000 mg/kg酵母培養(yǎng)物，特定生長(zhǎng)率有下降的趨勢(shì)且飼料系數(shù)有所增加，因此，高濃度添加酵母培養(yǎng)物并不能使草魚的生產(chǎn)性能進(jìn)一步改善，與他們的報(bào)道一致�？赡苡捎谶^(guò)高劑量YC 引起的免疫反應(yīng)過(guò)度，使用于生長(zhǎng)的量或營(yíng)養(yǎng)素減少，具體原因有待進(jìn)一步證明。