微生態(tài)凈水劑對鯉血液生理生化指標的影響

cjlittlepig

摘自《水生態(tài)雜志》

摘要：實驗研究了微生態(tài)凈水劑對鯉血液生理指標和生化指標的影響。施加微生態(tài)凈水劑65ｄ后，顯著降低了鯉紅細胞的滲透脆性，使紅細胞數(shù)由112.60萬個／ｍｍ３ 顯著增加到122.40萬個／ｍｍ３（Ｐ＜0.05）；血紅蛋白由4.60ｇ／100ｍＬ極顯著增加到6.90ｇ／100ｍＬ（Ｐ＜0.01）；紅細胞壓積由35.2％顯著增加到39.2％（Ｐ<0.05）；血清中TP、ALB、GLO、白球比的含量無明顯變化；血清中GLU、ALP分別較對照組提高了221％（Ｐ＜0.01）、51％（Ｐ＜0.05）；血清中ACP、GPT分別較對照組降低了14％（Ｐ＞0.05）、24％（Ｐ＜0.05）。微生態(tài)凈水劑能優(yōu)化鯉的抗應激指標，提高魚體防御功能，增強抵抗疾病的能力。

關鍵詞：微生態(tài)凈水劑；鯉；血液；生理指標；生化指標

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    隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，未經(jīng)處理的養(yǎng)殖廢水、工業(yè)和生活污水的任意排放，使天然水域受到污染，養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境惡化，導致水產(chǎn)動物的病害問題日趨嚴重。為了保護生態(tài)環(huán)境和人類健康，我國開始將微生態(tài)制劑應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中。微生態(tài)凈水劑是由光合細菌、乳酸菌、節(jié)桿菌、硝化細菌等微生物復合培養(yǎng)而成的，該制劑無毒、無副作用，不產(chǎn)生耐藥性，能有效改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，增強動物的抗病能力，減少病害的發(fā)生，是一項有利于水產(chǎn)養(yǎng)殖健康的新技術（陳文忠等，2004；瑞君和魏銀萍，2005；官瓊等，2005）。目前，微生態(tài)凈水劑在整個水產(chǎn)養(yǎng)殖中大多數(shù)是直接作用于水體。李卓佳等（2005）報道了微生態(tài)凈水劑能抑制病原微生物和有害物質(zhì)，調(diào)節(jié)生態(tài)環(huán)境，促進養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中的正常菌群和有益藻類的生長；關于微生態(tài)凈水劑對魚類血液生理生化指標影響的研究尚無報道。本文通過在鯉養(yǎng)殖水體潑灑一定濃度的微生態(tài)凈水劑，了解其對鯉血液生理生化指標的影響，為改善魚的體質(zhì)，實現(xiàn)綠色無公害養(yǎng)殖提供一定的理論依據(jù)。

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1材料和方法
1.1實驗材料
    鯉材料魚采自天津市寧河縣海天養(yǎng)殖場，試驗于2007年４月中旬開始。實驗魚為雜交鯉平均體長（20.1±4.5）ｃｍ，平均體重（92.75±16.01）ｇ。采用除氯自來水，溫度（11.2±1.9）℃，試驗前至少在室內(nèi)馴養(yǎng)5ｄ，試驗前1ｄ不投喂，隨機選取個體差異不大、健康活潑的鯉用于實驗。實驗分為２個實驗組和２個對照組，各組分別采用1000ｍ３的圓形水泥水槽中，每組隨機放養(yǎng)鯉120尾。
    微生態(tài)凈水劑購自廈門利洋水產(chǎn)品有限公司，含有光合細菌、枯草芽孢桿菌、硝化細菌、節(jié)桿菌，含菌量為10×10９個／ml。
1.2飼養(yǎng)管理
    實驗用充氣泵充氧，使溶解氧保持在5.0mg／Ｌ以上，每天監(jiān)測水溫、溶氧、pＨ值。每3ｄ天測定水質(zhì)（ＮＯ３－Ｎ、ＮＯ２－Ｎ、ＮＨ４＋ －Ｎ），每5ｄ加水質(zhì)凈化劑30ml／ｍ３，每隔15ｄ換１次水（換水30％ ～50％）。投餌率２％ ～３％，以30min吃完為限，每天早、中、晚各投喂１次，并及時清除殘餌；實驗期為65ｄ。
1.3方法
1.3.1血樣制備　
    實驗結(jié)束后，鯉饑餓１d，在同一時間采其血液樣品，用１％肝素鈉處理的注射器，從尾動靜脈取血，一部分直接加入5.0ｍＬ離心管中，４℃靜置２ｈ，2500ｒ／min、４℃離心25min，以制備血清，用于各項生化指標的測定；另一部分用１％的肝素鈉抗凝，以制備抗凝血用于各項生理指標的測定。
1.3.2生理指標及測定方法　
    紅細胞計數(shù)（RBC）、白細胞計數(shù)（WBC）用常規(guī)計數(shù)法；血紅蛋白含量（Hb）用沙利氏比色法；紅細胞壓積（HCT）、紅細胞沉降率（ESR）采用Westergren法。
    血沉方程Ｋ值＝－ＥＳＲ／［lnＨＣＴ＋（１－ＨＣＴ）］
    ＶＩ＝ＨＣＴ×２．３/（ＲＢＣ×２０）
    ＣＩ＝Ｈｂ×６．９/（ＲＢＣ×２０）
    ＳＩ＝Ｈｂ×６．９/（ＨＣＴ×2.3）
    平均紅細胞體積（ＭＣＶ）＝ＨＣＴ×１０/ＲＢＣ
    平均紅細胞血紅蛋白（ＭＣＨ）＝Ｈｂ/ＲＢＣ
    平均紅細胞血紅蛋白濃度（ＭＣＨＣ）＝Ｈｂ×１０/ＨＣＴ
    紅細胞滲透脆性采用漢伯格－里比拉方法測定（桂遠明，２００４）
1.3.3生化指標及測定　
    所有生化指標在Microlab300半自動生化分析儀上完成。血液生化指標測定方法見參考周玉等（2002）報道，在24ｈ內(nèi)完成測定；得到的血清立即進行血糖指標的測定。
1.3.4水質(zhì)指標的測定方法　
    ＮＨ４＋－Ｎ采用奈氏試劑法測定；ＮＯ２－Ｎ采用重氮－偶氮比色法測定；ＮＯ３－Ｎ采用鋅鎘還原－重氮偶氮法即鎘柱還原法（雷衍之等，２００６）。
1.4數(shù)據(jù)處理
    所有數(shù)據(jù)均為２０個樣品的平均值，以平均值±標準差（Ｍ±ＳＤ）的形式表示。由SPSS13.0程序包進行生物學統(tǒng)計，用ｔ檢驗使用微生態(tài)凈水劑前后各指標變化的顯著性。

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2結(jié)果與分析
2.1微生態(tài)凈水劑對養(yǎng)殖水質(zhì)的影響
    由圖１可見，養(yǎng)殖水體的氨氮隨著時間的推移呈現(xiàn)先上升、后下降、再上升的趨勢，但微生態(tài)凈水劑組氨氮的上升的幅度明顯較低，下降的幅度明顯較高且持續(xù)的時間很長。由此可見，水質(zhì)凈化劑具有降低氨氮的作用，隨著養(yǎng)殖時間的延長，凈水效果更加明顯。
2.2血液生理指標
    由表１可見，添加微生態(tài)凈水劑的實驗組能優(yōu)化鯉的血液學指標，特別是紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細胞壓積以及血沉、平均紅細胞體積、平均紅細胞血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白濃度均較對照組顯著增加（Ｐ＜0.05）；其中，血紅蛋白含量、血沉方程、平均紅細胞體積、平均紅細胞血紅蛋白較對照組極顯著增加（Ｐ＜0.01）；白細胞數(shù)試驗組較對照組差異不顯著（Ｐ＞0.05）。
    從圖２可以看出，實驗組較對照組的滲透脆性曲線左移，紅細胞滲透脆性減少，當NaCl濃度達到0.43％時，對照組的溶血率就已經(jīng)達到了100％，說明微生態(tài)凈水劑能提高鯉紅細胞對低滲鹽溶液的抵抗能力，表明微生態(tài)凈水劑組的鯉紅細胞的剛性較強。
2.3血液生化指標
    從表２可以看出，實驗組與對照組相比，血清中TP、ALB、GLO、白球比的含量無明顯變化，TG、γ球蛋白、GLU分別較對照組提高了354％（Ｐ＜0.01）、78％（Ｐ＜0.05）、221％（Ｐ＜0.01），ALP提高了51％（Ｐ＜0.05），ACP活性和GPT活性分別較對照組降低了14％（Ｐ＞0.05）、24％（Ｐ＜0.05）。

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3討論
3.1微生態(tài)凈水劑對鯉生理指標的影響
    血液生理指標在一定程度上反映出養(yǎng)殖對象的營養(yǎng)和機能狀態(tài)。尾崎久雄（1982）研究發(fā)現(xiàn)，魚類在餌料不充足、水質(zhì)條件惡劣的情況下，紅細胞數(shù)目和血紅蛋白含量將下降。本研究結(jié)果表明，微生態(tài)凈水劑處理后，魚類的紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、血細胞比容明顯高于對照組，這與伍莉和陳鵬飛（2006）的研究結(jié)果一致。魚類紅細胞數(shù)、血紅蛋白和血細胞比容指標的上升反映了血液輸氧能力的升高，當環(huán)境條件改變時，導致魚體需氧量減少，進而使代謝水平降低，但微生態(tài)凈水劑組魚類會適應此環(huán)境條件的改變，說明微生態(tài)凈水劑能夠提高鯉的應激能力。引起血細胞全部溶血的NaCl濃度即為紅細胞最大抵抗值，用紅細胞滲透脆性表示（桂遠明，2004）。微生態(tài)凈水劑對鯉紅細胞的溶血率極顯著降低，使?jié)B透曲線左移，說明施加微生態(tài)凈水劑可以使鯉紅細胞的剛性增強，增加其對外界低滲鹽溶液的抵抗能力，有利于提高鯉對外界水環(huán)境改變的適應性。
3.2微生態(tài)凈水劑對鯉生化指標的影響
    動物血液的生化參數(shù)是動物機體健康狀況的主要指標，也是疾病診斷的依據(jù)之一。魚類血液中的生化指標在正常情況下比較穩(wěn)定（周玉等，2002）。但是當魚體生長環(huán)境改變或發(fā)生病變時，許多生化指標會發(fā)生明顯改變，并以此判斷魚體的生理變化，用于魚類疾病的診斷和環(huán)境監(jiān)測。當肝臟、心肌病變，細胞壞死或通透性增加時，酶即釋放于血清中，某些生化指標的活性便會升高。因此，動物血清的生化指標是動物機體健康狀況的主要指標，也是其疾病診斷和測定的依據(jù)之一（劉志強等，1999）。
    本實驗中，微生態(tài)凈水劑組的ACP、GPT的活性明顯低于對照組，說明微生態(tài)凈水劑可以促進養(yǎng)殖魚類的健康生長，提高魚體的免疫能力，增強養(yǎng)殖魚類的抗病力，這與翟秀梅等（2007）的研究結(jié)果一致。微生態(tài)凈水劑促進養(yǎng)殖魚類的健康，可能是其能改善養(yǎng)殖水體的水質(zhì)，起到加強有機物的降解、提高水體自凈能力的作用；水體環(huán)境得到改善，則可以間接地促進養(yǎng)殖魚類的健康。本次實驗，微生態(tài)凈水劑使鯉血清中轉(zhuǎn)氨酶活性降低，可能是其通過鰓組織滲透進入血液循環(huán)，在肝臟中參與脂肪代謝，降低了脂肪的含量，避免了脂肪肝的發(fā)生，其作用機理有待進一步研究。90％以上的血清總蛋白和白蛋白是肝臟合成的，因此，其檢測數(shù)據(jù)是反映肝臟功能的重要指標。微生態(tài)凈水劑組總蛋白和白蛋白高于對照組，說明其對肝臟蛋白質(zhì)的合成有良好的促進作用。堿性磷酸酶不僅與磷代謝密切相關，而且是重要的解毒體系。本次實驗結(jié)果表明，微生態(tài)凈水劑組血清中堿性磷酸酶的活性明顯高于對照組，進一步說明施加微生態(tài)凈水劑能夠提高魚體的解毒能力。施加微生態(tài)凈水劑后，鯉的血液生理和生化得到了優(yōu)化，提高了魚體的應激能力，表明了微生態(tài)凈水劑具有安全性和有效性，在水產(chǎn)行業(yè)將有良好的發(fā)展前景。