譯：蔡章潔/鄧美英 中國(guó)水產(chǎn)頻道獨(dú)家報(bào)道，以泰國(guó)T.W.Flegel教授以及臺(tái)灣羅竹芳教授為首的研究人員已經(jīng)公開(kāi)確定引起急性肝胰腺壞死�。╤epatopancreatic necrosis disease，AHPND）的那株特異性副溶血性弧菌的PCR快速檢測(cè)的方法，并且公布了檢測(cè)方法的PCR引物以及反應(yīng)方法。 前言： 在泰國(guó)，實(shí)驗(yàn)由Centex Shrimp (泰國(guó)瑪希隆大學(xué)杰出人才中心對(duì)蝦研究組)、瑪希隆大學(xué)公共衛(wèi)生部和水產(chǎn)養(yǎng)殖企業(yè)研究中心部、水產(chǎn)科學(xué)研究院、農(nóng)業(yè)大學(xué)等多名研究人員完成的。自2011以來(lái)，這項(xiàng)工作得到了農(nóng)業(yè)研究發(fā)展機(jī)構(gòu)、臺(tái)灣國(guó)家科學(xué)委員會(huì)等多個(gè)機(jī)構(gòu)的資金支持。 2013年12月5日，研究人員通過(guò)獲得的基因序列的對(duì)比信息，參照對(duì)比信息可以測(cè)試不同的PCR檢測(cè)方法，他們花了近20天的時(shí)間來(lái)驗(yàn)證不同的PCR檢測(cè)，并公布了他們認(rèn)為最好的檢測(cè)方式。 PCR 操作： 預(yù)熱 : 94°C, 5min PCR 25~30 cycles with： 變性 : 94°C, 30 sec 退火 : 60°C, 30 sec 延伸 : 72°C, 60 sec 后延伸 : 72°C, 10 min 擴(kuò)增產(chǎn)物 : ~700 bp AHPND 引物組1 (AP1) AP1F：- 5’- CCTTGGGTGTGCTTAGAGGATG -3’ AP1R：- 5’- GCAAACTATCGCGCAGAACACC -3’ AP1擴(kuò)增產(chǎn)物為700 bp AHPND 引物組2 (AP2) AP2F：- 5’- TCACCCGAATGCTCGCTTGTGG -3’ AP2R：- 5’- CGTCGCTACTGTCTAGCTGAAG -3’ AP2擴(kuò)增產(chǎn)物為700 bp 
正文如下： 目前，養(yǎng)蝦業(yè)在亞洲的經(jīng)濟(jì)局勢(shì)非常嚴(yán)峻，由對(duì)蝦死亡和停止養(yǎng)蝦造成的經(jīng)濟(jì)損失非常大。我們相信及時(shí)公布檢測(cè)方法，降低AHPND暴發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的所獲得的收益，遠(yuǎn)遠(yuǎn)比從檢測(cè)產(chǎn)品中收到的專(zhuān)利費(fèi)用以及我們研究所需要的費(fèi)用要多。如果要申請(qǐng)專(zhuān)利，還需要推遲幾周甚至到幾個(gè)月的時(shí)間用來(lái)準(zhǔn)備文件，以及準(zhǔn)備足量的商業(yè)檢測(cè)試劑盒投入市場(chǎng)，以滿足市場(chǎng)需求。我們無(wú)法預(yù)測(cè)推遲幾天、幾周甚至幾個(gè)月里，將造成的潛在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)損失。 基于以上諸多因素，我們決定公開(kāi)AHPND的PCR檢測(cè)操作方法，允許這些信息更為廣泛、迅速的傳播，以減少暴發(fā)AHPND的風(fēng)險(xiǎn)。 雖然我們已經(jīng)做了大量測(cè)試，但由于樣本數(shù)還是有限的，簡(jiǎn)單地說(shuō)，我們發(fā)現(xiàn)以下幾個(gè)情況： 1、這兩對(duì)引物檢測(cè)了68個(gè)樣品，兩對(duì)引物檢測(cè)67個(gè)樣本的檢測(cè)結(jié)果是一致的。 2、從糧農(nóng)組織在越南用于研究宏基因組學(xué)分析收集的對(duì)蝦肝胰臟組織（每個(gè)池塘10蝦）的14個(gè)樣本中，其中8個(gè)樣品具有積極的AHPND病理特征，但PCR檢測(cè)結(jié)果顯示5個(gè)為陽(yáng)性結(jié)果3個(gè)為陰性結(jié)果（兩對(duì)引物檢測(cè)顯示結(jié)果）;而5個(gè)樣品的AHPND病理特征不明顯的，兩對(duì)引物PCR檢測(cè)結(jié)果均為陰性結(jié)果。 3、68個(gè)測(cè)試樣本中分理出5株副溶血弧菌的AHPND樣本中，并通過(guò)生物鑒定都可以導(dǎo)致AHPND病變，其中有3個(gè)樣品是在2002年在對(duì)蝦底泥中分離得到的弧菌，并被證實(shí)并不會(huì)引起暴發(fā)AHPND（兩對(duì)引物檢測(cè)結(jié)果顯示呈陰性），另外2株在水體及蝦體取得的樣本，尚未進(jìn)行生物測(cè)試。 4、有一個(gè)弧菌生物測(cè)定不會(huì)導(dǎo)致AHPND的組織病理，但是養(yǎng)殖過(guò)程中的卻造成高死亡率并伴隨著肝胰腺組織病變癥狀，兩對(duì)引物PCR檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。 5、新分離的瓦氏菌（Shewanella）、紅球菌（Rhodococcus）、賴(lài)氏細(xì)菌（Leifsonia）、戴爾福特菌（ Delftia）、青枯菌（Ralstonia）、創(chuàng)傷弧菌（V. vulnificus）、哈維氏弧菌（ V. harveyi）、溶藻弧菌（V. alginolyticus）和枯草芽孢桿菌（B. subtilis）的兩對(duì)引物檢測(cè)結(jié)果為陰性。 至此，我們不能保證所闡述的方法與每個(gè)可能的非AHPND細(xì)菌的樣本或者其它有機(jī)體沒(méi)有交叉反應(yīng)。我們也不能保證這種方法能檢測(cè)出每一株可能引起對(duì)蝦AHPND的細(xì)菌。我們也邀請(qǐng)所有行業(yè)人員，幫助我們進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證、改進(jìn)這個(gè)檢測(cè)方法。 我們初步的序列拼接和序列比較分析表明，我們已經(jīng)確定了的目標(biāo)序列來(lái)自細(xì)菌的質(zhì)粒DNA并不是來(lái)自于AHPND菌株的染色體DNA。如果這個(gè)假設(shè)被證實(shí)，這也將影響AHPND有關(guān)的毒力傳導(dǎo)機(jī)制。然而確定毒素所需的時(shí)間目前還無(wú)法確定。由于情況緊急，我們決定發(fā)布PCR檢測(cè)引物序列信息，它將作為一個(gè)臨時(shí)檢測(cè)工具，直到毒素被確定。 【關(guān)鍵詞】：AHPND 細(xì)菌特異性檢測(cè) 引物序列 中國(guó)水產(chǎn)頻道獨(dú)家報(bào)道，轉(zhuǎn)載請(qǐng)說(shuō)明出處《水產(chǎn)前沿》雜志 www.szsfz.cn ，違者追究法律責(zé)任， 謝謝合作。 |
| 重點(diǎn)推薦 |
微博互動(dòng)免責(zé)聲明：
1、凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：水產(chǎn)前沿網(wǎng)”的所有作品，均為水產(chǎn)前沿網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：水產(chǎn)前沿網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
2、凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：XXX（非水產(chǎn)前沿網(wǎng)）”的作品，均轉(zhuǎn)載自其它媒體，轉(zhuǎn)載目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)。
3、如本網(wǎng)轉(zhuǎn)載涉及版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)作者在15天內(nèi)來(lái)電或來(lái)函與水產(chǎn)前沿網(wǎng)聯(lián)系。聯(lián)系方式：020-85595682。
