| 水產(chǎn)前沿網(wǎng)獨(dú)家報(bào)道，春回水暖，珠三角大量加州鱸出現(xiàn)肝、腎腫大死魚(yú)，是何病因，如何防控？ 文/ 活寶源魚(yú)病室胡飛、梁芝源、胡雄 大口黑鱸（Micropterus salmoides），又名加州鱸，隸屬鱸形目（Perciformes）太陽(yáng)魚(yú)科（Centrachidae）黑鱸屬（Micropterus），原產(chǎn)于北美洲密西西比河水系[1]。1983年引入我國(guó)廣東省，因其生長(zhǎng)迅速、養(yǎng)殖周期短、肉質(zhì)鮮美等，備受消費(fèi)者青睞，現(xiàn)已在我國(guó)廣東、江蘇、浙江、四川、福建等地區(qū)形成規(guī)模化養(yǎng)殖[2-3]。但近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖密度不斷增大、水體環(huán)境惡化、種質(zhì)退化等因素影響，大口黑鱸養(yǎng)殖過(guò)程中病害頻發(fā)，給養(yǎng)殖戶帶來(lái)了重大經(jīng)濟(jì)損失[4]。 2021年春、冬季節(jié)，珠三角地區(qū)多個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的大口黑鱸出現(xiàn)以腹部腫大、內(nèi)臟有白點(diǎn)為主要癥狀的疾病，且該病治療難度較大。為明確其病因，筆者對(duì)多份病樣進(jìn)行全面檢測(cè)，均從內(nèi)臟分離到大量細(xì)菌，經(jīng)16S rRNA基因測(cè)序鑒定為遲鈍愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella tarda）。 一、病情概況 2021年2月下旬以來(lái)，我們陸續(xù)接到多個(gè)養(yǎng)殖戶/養(yǎng)殖場(chǎng)反饋其加州鱸出現(xiàn)不明病因死魚(yú)現(xiàn)象，每天數(shù)十尾死魚(yú)，天氣轉(zhuǎn)涼病情稍有好轉(zhuǎn)，但天氣回暖時(shí)病情又迅速惡化，使用殺蟲(chóng)、消毒、拌喂抗生素等多種方案均未能有效控制病情，病情持續(xù)往往長(zhǎng)達(dá)半個(gè)多月。 二、主要癥狀 外觀上，部分病魚(yú)腹部膨大，部分病魚(yú)體表有個(gè)別點(diǎn)狀或斑塊狀淺表性潰瘍?cè)?P01)，也有部分病魚(yú)體表完好，無(wú)任何異狀(P02)；大部分病魚(yú)鰓絲紅潤(rùn)(P03)，個(gè)別病魚(yú)局部爛鰓(P04)；解剖，其肝臟、后腎等器官均有不同程度的腫大(P05)，且肝臟、脾臟、腎臟等表面有大量直徑約0.5-1.0mm的細(xì)小白點(diǎn)(P06)，部分病魚(yú)有腹水(P07)。 三、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 我們從多個(gè)類似病情的池塘采集病魚(yú)送至活寶源魚(yú)病室進(jìn)行全面檢測(cè)： �、偎|(zhì)檢測(cè)：使用魚(yú)順牌便攜式水質(zhì)快速檢測(cè)試劑盒檢測(cè)多個(gè)發(fā)病池塘水體的酸堿度(pH)、氨氮、亞硝酸鹽等常規(guī)指標(biāo)，pH均介于7.2-7.8，氨氮0.6-1.5mg/L，亞硝酸鹽0.15-0.3，均屬正常水平。 �、诩纳x(chóng)檢測(cè)：依次取適量病魚(yú)鰓絲、體表粘液、血液等制成水浸片，光學(xué)顯微鏡下鏡檢(4*4，4*10，4*40)，僅部分病魚(yú)鰓部有少量車輪蟲(chóng)或斜管蟲(chóng)，大部分病魚(yú)鰓絲無(wú)寄生蟲(chóng)或其它明顯異常(P08)，初步排除寄生蟲(chóng)病。 ③致病菌檢測(cè)：無(wú)菌操作，取病魚(yú)的肝臟、脾臟、腎臟等接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，28℃恒溫培養(yǎng)22h，均出現(xiàn)大量淺黃色、圓形、濕潤(rùn)菌落(P09)，這些菌落的形態(tài)高度一致。取典型菌落進(jìn)行革蘭氏染色，結(jié)果呈現(xiàn)紅色，菌體短桿狀，大小在(0.5-1.0)×(1.0-3.0)μm(P11)。結(jié)合我們的檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，初步判斷為高疑致病菌。 四、細(xì)菌鑒定與藥敏實(shí)驗(yàn) 將上述高疑致病菌分離、純化后，選取5株典型菌株，編號(hào)為2102221、2102225、2102256、2102271、2102272，進(jìn)行16S rRNA測(cè)序鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)等。 提取上述菌株的DNA，使用16S rRNA通用引物進(jìn)行體外擴(kuò)增，并送至上海生工生物工程有限公司測(cè)序，在NCBI上進(jìn)行Blastn比對(duì)分析，5株菌株的擴(kuò)增產(chǎn)物與遲鈍愛(ài)德華氏菌的相似度均高達(dá)99%。 配制0.5麥?zhǔn)蠁挝坏男迈r菌液，用無(wú)菌棉簽均勻涂布于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，進(jìn)行紙片法藥敏試驗(yàn)(藥敏片均購(gòu)自杭州微生物有限公司)。結(jié)果表明，5株不同菌株均對(duì)常見(jiàn)漁用抗生素的耐藥性差異很大：菌株2102252對(duì)恩諾沙星、氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素、硫酸新霉素、復(fù)方新諾明等5種抗生素均較為敏感；而菌株2102271、2102221僅對(duì)恩諾沙星、硫酸新霉素一般敏感，對(duì)鹽酸多西環(huán)素、復(fù)方新諾明高度耐藥；菌株2102256、2102272對(duì)氟苯尼考高度敏感，但菌株2102221卻對(duì)氟苯尼考高度耐藥。 五、結(jié)果分析 結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和相關(guān)資料，初步判斷本病由遲鈍愛(ài)德華氏菌感染引起。 遲鈍愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella tarda）隸屬腸桿菌科、愛(ài)德華氏菌屬，是一種革蘭氏陰性菌，其生長(zhǎng)溫度范圍為15-42℃，最適生長(zhǎng)溫度為37℃。該菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中危害較大，可侵染日本鰻鱺、大菱鲆、黃顙魚(yú)、大口黑鱸等，引起發(fā)病死魚(yú)。 根據(jù)我們的調(diào)研，在珠三角地區(qū)，該菌幾乎全年均可引起大口黑鱸發(fā)病死魚(yú)，其中，以秋末冬初(11-12月)和冬末春初(2-4月)最為流行，一齡魚(yú)、二齡魚(yú)均可發(fā)病。不同于已有文獻(xiàn)的報(bào)道[5]，該病的主要臨床癥狀為：病魚(yú)肝臟、脾臟表面有大量細(xì)小白點(diǎn)，且后腎有明顯的充血腫大現(xiàn)象。區(qū)別于諾卡氏菌病，本病病魚(yú)肝臟、脾臟等處的白點(diǎn)僅1mm左右，大小十分均勻，觸感較軟滑，且僅限于肝臟、脾臟等內(nèi)臟器官，不會(huì)出現(xiàn)在肌肉、鰓絲等處。 從藥敏結(jié)果看，這5株菌株對(duì)常見(jiàn)漁用抗生素的耐藥性差異很大，僅部分菌株對(duì)氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素、恩諾沙星等高度敏感，但不同菌株對(duì)這些抗生素的敏感性差異較大，不存在共同高度敏感的抗生素。這也不難理解，養(yǎng)殖戶在治療本病的過(guò)程中，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)用藥效果往往不明顯。盡管本病的日死亡率較低，但由于病程很長(zhǎng)，往往長(zhǎng)達(dá)2-3個(gè)星期，因而，總死亡量也較大，加之頻繁用藥，本病帶來(lái)的損失也較大。 六、防控建議 本病主要在秋末冬初和冬末春初流行，尤其是冬末春初氣溫回升階段發(fā)病率較高。這是因?yàn)椋阂环矫妫?jīng)過(guò)長(zhǎng)期的投喂和劇烈的天氣變化，加州鱸體質(zhì)普遍偏差，對(duì)病菌的抵抗力較弱；另一方面，冬季池塘水溫低，糞便等有機(jī)物分解慢，積蓄于塘底，成為病菌的溫床，在開(kāi)春氣溫回升時(shí)，微生物迅速大量繁殖，水質(zhì)惡化，病菌增多，很易發(fā)病。為預(yù)防本病，在開(kāi)春投喂時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)護(hù)肝，如拌喂膽汁酸、多維等；也應(yīng)加強(qiáng)使用乳酸菌、芽孢桿菌等有益菌，調(diào)節(jié)水質(zhì)，擠壓病菌的生態(tài)位。 如已發(fā)病，可先進(jìn)行水體消毒，防止病情蔓延惡化，并第一時(shí)間采樣送至專業(yè)的魚(yú)病診斷機(jī)構(gòu)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)與藥敏實(shí)驗(yàn)，根據(jù)藥敏結(jié)果選用敏感抗生素拌料投喂，切莫盲目用藥。 值得指出，我國(guó)常見(jiàn)的漁用抗生素休藥期在375~750℃·d之間，亦即一旦選用抗生素內(nèi)服，在水溫18℃時(shí)，至少需要停藥21天才能上市（視抗生素種類和實(shí)際水溫而定），因此，如果病魚(yú)已達(dá)上市規(guī)格，則應(yīng)盡量避免使用抗生素拌料投喂，而建議選用一些殺菌力較強(qiáng)的消毒劑進(jìn)行水體消毒，以控制病情。 |
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