文/圖 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 陳昌福、武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司 周鑫軍

　　近一段時(shí)間，我們?cè)凇?a href="http://www.szsfz.cn" target="_blank" class="relatedlink">水產(chǎn)前沿》微信公眾平臺(tái)上，陸續(xù)發(fā)布了部分關(guān)于二氧化氯（Cl02）片劑和單過(guò)過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽等水產(chǎn)養(yǎng)殖用物質(zhì)的應(yīng)用效果試驗(yàn)報(bào)告后，引起了廣大水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者及其相關(guān)行業(yè)業(yè)者的普遍關(guān)注。有不少讀者通過(guò)在文章后面留言、直接給我們發(fā)送微信或者來(lái)電話的方式，詢問和探討了試驗(yàn)報(bào)告中涉及的大量相關(guān)技術(shù)問題，更多地讀者通過(guò)各種信息渠道對(duì)于我們的工作給予了熱心鼓勵(lì)！還探討了關(guān)于Cl02片劑究竟該如何使用，以及我國(guó)市場(chǎng)上單過(guò)硫酸氫鉀產(chǎn)品存在的質(zhì)量問題等。對(duì)于我們?cè)囼?yàn)報(bào)告中反映出來(lái)的部分問題，我們已經(jīng)以獲得的試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，與提出相關(guān)問題的讀者們進(jìn)行了統(tǒng)一回復(fù)和個(gè)別溝通。

　　還有部分讀者通過(guò)各種渠道回饋給我們的意見中，對(duì)我們?cè)谕瓿稍囼?yàn)中收集的樣品提出了質(zhì)疑，認(rèn)為試驗(yàn)中使用的樣品均為一些偽劣產(chǎn)品，根本不能代表市場(chǎng)上流通同類產(chǎn)品的真實(shí)情況，存在誤導(dǎo)產(chǎn)品消費(fèi)者的問題。也有部分讀者通過(guò)各種媒體平臺(tái)以及利用自媒體的形式，介紹了自己企業(yè)生產(chǎn)二氧化氯和單過(guò)硫酸氫鉀的生產(chǎn)工藝、作為“水產(chǎn)養(yǎng)殖用物質(zhì)”的“消毒、調(diào)水和改底”的作用原理等。對(duì)于提出這類問題與意見的讀者，我們十分樂意在此再次表明我們對(duì)于這項(xiàng)工作的態(tài)度如下：

　　首先，我國(guó)制售Cl02制劑和單過(guò)過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽的企業(yè)有很多家，我們?cè)谠囼?yàn)中使用的樣品大多是從湖北省武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)的漁藥銷售點(diǎn)隨機(jī)購(gòu)買的，因?yàn)闃悠穪?lái)源地比較單一，我們承認(rèn)試驗(yàn)中采用的樣品存在局限性的問題，可能沒有采購(gòu)到國(guó)內(nèi)市場(chǎng)流通的同類產(chǎn)品中的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，這種可能性的確是存在的。

　　其次，完成這類試驗(yàn)的目的非常明確，唯一的目的就是為我國(guó)廣大的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者尋求到“質(zhì)量可控，安全有效”的“水產(chǎn)養(yǎng)殖用物質(zhì)”。而采用的方法就是在相同條件的平臺(tái)上完成比較試驗(yàn)，最后根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果判定產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣。

　　其三，為了達(dá)成為我國(guó)廣大的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者尋求到“質(zhì)量可控，安全有效”的“水產(chǎn)養(yǎng)殖用物質(zhì)”的目標(biāo)，我們自始至終均采取了開放式的工作態(tài)度。在已經(jīng)發(fā)布的幾篇試驗(yàn)報(bào)告結(jié)尾部分，均發(fā)表了我們的如下內(nèi)容的聲明：

　　各位讀者：我們完成這個(gè)試驗(yàn)并且決定將結(jié)果公布出來(lái)只是基于一個(gè)目的：為我國(guó)廣大的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者尋找到適宜的物質(zhì)和確定其科學(xué)、合理的用法和用量，也為我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的健康、綠色、可持續(xù)發(fā)展做出一點(diǎn)努力。我們不是藥企經(jīng)營(yíng)者也未接受任何藥企的委托。因此，不存在為了推出某種產(chǎn)品而打擊其他公司的同類產(chǎn)品的目的和主觀意圖！

　　在此，我們熱忱地歡迎制售這類產(chǎn)品的企業(yè)，能安排相關(guān)人員帶著貴公司的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，光臨我們的實(shí)驗(yàn)室，讓我們按照上述文章中的試驗(yàn)方法一起完成相關(guān)試驗(yàn)，也給我們提供一次向有作為企業(yè)家學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)！

　　令我們深感失望的結(jié)果是，自相關(guān)試驗(yàn)報(bào)告發(fā)布后，我們獲得了大量的反饋信息，且大致內(nèi)容可以分為如下幾類：給予鼓勵(lì)或者點(diǎn)贊的（我們推測(cè)可能主要是一些從事水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的朋友），提出具體質(zhì)疑意見的（我們已經(jīng)盡力地給予了明確地回復(fù)意見），送來(lái)惡意的貶損意見的（我們也盡力地給予了善意的回復(fù)），還有少數(shù)送來(lái)謾罵言辭的（我們知道發(fā)布的試驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容可能動(dòng)了這些人的“奶酪”，因此我們對(duì)這些聲音采取了漠視的態(tài)度）。

　　迄今為止，沒有一位制售Cl02制劑和單過(guò)過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽的企業(yè)家，幫助我們實(shí)現(xiàn)“帶著公司的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，光臨我們的實(shí)驗(yàn)室，讓我們按照上述文章中的試驗(yàn)方法一起完成相關(guān)試驗(yàn)，也給我們提供一次向有作為企業(yè)家學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)”的愿望！

　　為此，我們?cè)诖嗽俅螌?duì)制售Cl02制劑和單過(guò)過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽的企業(yè)家發(fā)出如下呼吁：認(rèn)真響應(yīng)今年的3月19日，由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局發(fā)布的“依法應(yīng)按獸藥管理的水產(chǎn)養(yǎng)殖用物質(zhì)類型清單的公告（征求意見稿）”公開征求意見的內(nèi)容，保證制售的產(chǎn)品能滿足作為“水產(chǎn)養(yǎng)殖用物質(zhì)”的“質(zhì)量可控，安全有效”的基本要求。武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司愿意配合各位企業(yè)家，按照如下試驗(yàn)方法完成對(duì)貴公司產(chǎn)品的效果試驗(yàn)。

　　用于完成殺菌試驗(yàn)的養(yǎng)殖池水，取自武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)魚苗孵化場(chǎng)同一個(gè)養(yǎng)殖池塘的池水。將取回的養(yǎng)殖池水經(jīng)過(guò)浮物生物網(wǎng)過(guò)濾后，在每個(gè)容量為250.0mL玻璃三角瓶中加入100.0mL養(yǎng)殖池水，經(jīng)高壓滅菌處理后。

　　將引起淡水魚類細(xì)菌性敗血癥的病原菌嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila），引起養(yǎng)殖魚類細(xì)菌性爛鰓病的柱狀黃桿菌（Flavobacterium coloumnare），引起水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物愛德華菌病的遲緩愛德華氏菌（Edwardsilla tarda）和引起海、淡水魚類潰瘍病的鰻弧菌（Vibrio anguillarum）等4種致病菌，將冷凍保存菌株接種在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA，Difco）上，25℃培養(yǎng)48 h，以滅菌生理鹽水洗下菌苔，離心集菌，用滅菌生理鹽水將其調(diào)節(jié)成菌液濃度為107cfu/mL的活菌液，置于4℃冰箱中保存，備用。

　　將Cl02粉劑或者片劑（先粉碎后活化），準(zhǔn)確稱取1.0g分別投放與盛有10.0mL、20.0mL、40.0mL、60.0mL、80.0mL和100.0mL蒸餾水的玻璃燒杯中，待其活化1.0min、5.0min、10.0min、15.0min、20.0min、25.0min、30.0min、35.0min和40.0min后，分別從各種濃度的Cl02制劑溶液中，準(zhǔn)確吸取定量溶液做以下殺菌試驗(yàn)。

　　待不同劑量的Cl02粉劑或者片劑（先粉碎后活化）按照設(shè)定的劑量在蒸餾水中溶解完畢后，采用由臺(tái)灣衡欣科技股份有限公司生產(chǎn)的掌上型溶氧計(jì)、筆型氧化還原計(jì)和上海力辰邦西儀器科技有限公司生產(chǎn)的酸度計(jì)，分別對(duì)Cl02溶液中的溶氧量、pH和氧化還原電位進(jìn)行測(cè)定。

　　在無(wú)菌條件下，向每個(gè)盛有100.0mL滅菌養(yǎng)殖池水的玻璃三角燒瓶中，加入0.5mL濃度為107cfu/mL的A.hydrophila、F.coloumnare、E.tarda）和V.anguillarum活菌液，輕輕搖動(dòng)玻璃三角瓶使活菌液均勻分布，將盛有活菌液的玻璃三角瓶繼續(xù)靜置15min后，按照0.30mg/L、0.60mg/L和0.90mg/L的濃度，向不同的玻璃三角瓶中添加按照不同活化濃度與時(shí)間制備的ClO2制劑溶液。

　　將添加完Cl02制劑溶液后的玻璃三角瓶再繼續(xù)靜置40.0min后，從每一個(gè)玻璃三角瓶中取50.0μL水樣，均勻涂布在盛有BHIA培養(yǎng)基的平皿中，將涂布好的培養(yǎng)皿置于在28℃恒溫培養(yǎng)箱中，連續(xù)培養(yǎng)48h。

　　根據(jù)培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出的菌落數(shù)量，判斷按照不同活化濃度與時(shí)間制備的Cl02制劑溶液的殺菌效果，并且根據(jù)殺菌效果推定Cl02粉劑的最佳活化濃度與時(shí)間。

　　本試驗(yàn)在武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)魚苗孵化場(chǎng)的養(yǎng)殖池塘中進(jìn)行。該養(yǎng)殖池塘7畝，水深2.5米左右。試驗(yàn)過(guò)程中，于18:30測(cè)定1.0m水深處的水質(zhì)指標(biāo)為亞硝酸鹽低于0.05mg/L、氨態(tài)氮0.2mg/L、溶解氧6.5mg/L以上，pH 8.5。試驗(yàn)期間水溫變化范圍26.0~27.0℃。

　　為了保證待試藥物的藥物濃度在養(yǎng)殖水體中的準(zhǔn)確性，采用PVC板制作了12個(gè)規(guī)格一致的內(nèi)口徑邊長(zhǎng)60.0cm的正方形、高度2.48m的圍隔。

　　圍隔在使用前，將其放置在養(yǎng)殖池塘中浸泡了4d。正式試驗(yàn)時(shí)，將圍隔以站立的形式放置在養(yǎng)殖池塘中。精確測(cè)定圍隔中的池水水體體積后，根據(jù)圍隔內(nèi)水體的體積計(jì)算出用藥量，定量使用待試藥物。

　　在圍隔中用藥結(jié)束后，分別在經(jīng)過(guò)1.5h和3.0h后，在圍隔內(nèi)利用采水器分別在離水面0.3m、1.0m和2.0m處采集水樣，同時(shí)在圍隔外的池塘中同樣水層采集水樣，作為為用消毒劑的對(duì)照組。

　　將采集的水樣盛裝在經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理的玻璃試管內(nèi)，并置放與帶有冰塊的采樣箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室，在30min時(shí)間內(nèi)完成從采水樣到在培養(yǎng)基上接種細(xì)菌的過(guò)程。

　　采集的水樣帶回實(shí)驗(yàn)室后，在無(wú)菌條件下從每個(gè)水樣中吸取500.0μL，在滅菌后的試管中用滅菌生理鹽水進(jìn)行10倍、100倍、1000倍和10000倍的系列稀釋。分別從稀釋后的水樣中吸取50.0μL池塘水，接種在盛有BHIA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個(gè)稀釋度的水樣接種3個(gè)培養(yǎng)皿。接菌后的培養(yǎng)皿放在28℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h后，通過(guò)計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)的菌落數(shù)，評(píng)價(jià)各種消毒劑在池塘水體中的殺菌效果。

　　對(duì)單過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽的試驗(yàn)方法與內(nèi)容大致上與上述完成Cl02制劑的試驗(yàn)方法與內(nèi)容相似。具體試驗(yàn)方法與內(nèi)容，可以根據(jù)各個(gè)企業(yè)的需求做符合科學(xué)要求的前提下具體修改后進(jìn)行。

　　有意與我們一起完成產(chǎn)品效果試驗(yàn)的企業(yè)家，可以就以下內(nèi)容簽訂相關(guān)協(xié)議：

　　首先，供試產(chǎn)品可以由產(chǎn)品制售公司提供，但是，每種樣品最少需要2包。其中一包供做試驗(yàn)用，另一包作留樣備查。也可以告訴我們貴公司產(chǎn)品在湖北省武漢市內(nèi)或者周邊的經(jīng)銷商的聯(lián)系方式和具體地址，我們前去自行采購(gòu)（采購(gòu)費(fèi)用請(qǐng)制售公司能承擔(dān)）。

　　其次，按照上述方法完成的試驗(yàn)結(jié)果，如實(shí)地匯報(bào)給各個(gè)企業(yè)，由企業(yè)決定是否將結(jié)果對(duì)外發(fā)布。如果企業(yè)認(rèn)為試驗(yàn)結(jié)果可以對(duì)外發(fā)布，我們可以根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果撰寫成試驗(yàn)報(bào)告，在適宜的媒體平臺(tái)對(duì)外發(fā)布。

　　其三，武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司對(duì)每個(gè)樣品，收取2000元的試驗(yàn)費(fèi)用（可開具發(fā)票）。試驗(yàn)費(fèi)用是用于按照上述試驗(yàn)方法完成試驗(yàn)的器材與人工費(fèi)，以及按照試驗(yàn)結(jié)果整理成文發(fā)布的技術(shù)資料費(fèi)。

　　其四，武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司對(duì)提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性等，負(fù)全部責(zé)任。

　　其五，如果有企業(yè)家有意合作完成上述試驗(yàn)內(nèi)容，可以首先通過(guò)快遞的方式將樣品送至：湖北省武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)汪集中學(xué)旁，武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司，萬(wàn)家樂先生（13986630593）。

陳昌福

周鑫軍

2020年10月9日