| 中國水產(chǎn)頻道原創(chuàng)報道， 文/圖中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所王印庚等 2020年春季，新冠疫情正在全國各地肆虐，對蝦苗種場“玻璃苗”現(xiàn)象也在沿海各地爆發(fā)。該現(xiàn)象主要在苗種場和標苗場發(fā)生，患病蝦苗表現(xiàn)為活力弱、體色暗濁，肝胰腺輪廓模糊、顏色變蒼白呈淡黃色，組織解體呈玻璃樣病變，空腸空胃，隨之呈現(xiàn)急性死亡，養(yǎng)殖業(yè)者稱之為“玻璃苗”。自3月份，該疾病首先在南方苗種場呈現(xiàn)爆發(fā)性趨勢，并逐步在北方沿海一帶蔓延，導致我國春季蝦苗供應嚴重不足。同時，投放的劣質(zhì)蝦苗也導致早期對蝦養(yǎng)成率明顯下降，這勢必對對蝦產(chǎn)量產(chǎn)生重大影響。4月初至6月，中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所水產(chǎn)動物藥理及疾病臨床團隊對廣東、福建、浙江、山東、河北、天津等地苗種場進行樣品收集和致病因綜合分析。 01、流行病學調(diào)查分析 河北省滄州市坐落于渤海灣腹地，是我國最大的對蝦苗種繁育基地之一，現(xiàn)有苗種場240余家，每年育苗能力約300億尾。本團隊對該地區(qū)多家對蝦育苗場開展了流行病學調(diào)查分析。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，發(fā)生對蝦“玻璃苗”現(xiàn)象的苗種場占該地區(qū)的60%以上；大多數(shù)苗種場是采購外地蝦苗（廣東、福建、山東等地）經(jīng)標粗后再次銷售。一般標苗后2~3d即出現(xiàn)玻璃苗現(xiàn)象，隨即24h內(nèi)蝦苗大部分死亡并排塘處置；甚至部分苗種抵運當天即出現(xiàn)該現(xiàn)象。依據(jù)患病程度不同，出現(xiàn)明顯玻璃化癥狀的苗種數(shù)量可占個別苗池總數(shù)的80%。 為進一步查明該區(qū)域?qū)ξr“玻璃苗”的主要致病原，選取了滄州市5個不同區(qū)位的苗種場，取患病和健康對蝦及其養(yǎng)殖水體進行病原檢測分析，編號依次為H1、H2、H3、H4、H5（表1）。分別通過病毒檢測試劑盒、弧菌和可培養(yǎng)細菌分離鑒定、石蠟組織切片、超微病理學觀察等手段進行病原及病理學分析。 典型癥狀： 患病蝦苗表現(xiàn)為活力降低、厭食甚至空腸空胃，蝦體消瘦、暗濁；肝胰腺輪廓模糊、組織解體萎縮、顏色變淺呈淡黃色，甚至肝胰腺區(qū)由正常的飽滿褐色組織變?yōu)榭瞻椎牟ＡЩ癄顟B(tài)，進而使得頭胸甲區(qū)域甚至腹部呈現(xiàn)瘦小、蒼白、暗濁狀態(tài)（圖1）。
圖1，對蝦“玻璃苗”臨床表觀癥狀（空心箭頭為健康蝦苗；實心箭頭為玻璃苗） 養(yǎng)殖系統(tǒng)細菌監(jiān)測： 通過使用對蝦病原（IHHNV/EHP）熒光定量檢測試劑盒（FRK-307）、桃拉綜合癥病毒（TSV）核酸檢測試劑盒（DHelix）和對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）核酸檢測試劑盒（DHelix）進行常見病毒和微孢子蟲攜帶情況分析，發(fā)現(xiàn)患有典型“玻璃苗”癥狀的蝦苗均未檢測出上述相關病原的攜帶。 對五家育苗場共計10個單元的養(yǎng)殖水體及其蝦苗肝胰腺組織中可培養(yǎng)細菌和弧菌的數(shù)量和種類進行檢測分析，發(fā)現(xiàn)育苗水體的可培養(yǎng)細菌總量均在103數(shù)量級，弧菌占比高達40.2~97.4%（表1）。通過對不同場區(qū)患病蝦苗分離得到的優(yōu)勢菌株進行分離鑒定表明，5個育苗場內(nèi)的優(yōu)勢菌株均為弧菌，其中新喀里多尼亞弧菌、溶藻弧菌的檢出率最高，且優(yōu)勢度較大；此外包括副溶血弧菌、歐文氏弧菌、塔氏弧菌、錫那羅州弧菌等不同種類的弧菌也被檢出。 經(jīng)過初步的人工感染試驗表明：新喀里多尼亞弧菌、溶藻弧菌兩種弧菌均對凡納濱對蝦的PL5、PL20仔蝦以及幼蝦有很強的致病性，并可出現(xiàn)自然發(fā)病的典型癥狀。藥敏試驗分析表明，上述兩種弧菌對常用的抗生素例如利福平、吡哌酸、鏈霉素、多粘菌素、青霉素、復方新諾明等有明顯的耐藥性。
02、組織病理特征 石蠟組織切片表明，患病對蝦肝胰腺萎縮，肝小管上皮細胞壞死、脫落，肝小管中充斥大量的碎片組織并逐步褐化、黑化。隨著感染程度的加劇，肝小管組織大面積壞死，殘存少量的纖維化細胞基質(zhì)結(jié)構(gòu)，甚至完全消失，使得肝胰腺組織出現(xiàn)大面積空白區(qū)域，呈現(xiàn)玻璃化組織壞死（圖2a）。 超微組織病理檢測表明，患病對蝦肝胰腺和腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量細菌，優(yōu)勢菌株為桿狀菌且呈弧形。肝小管上皮細胞的細胞膜消融，細胞與細胞間界限模糊，細胞器解體，細胞核固化，細胞解體呈碎片并脫落到肝小管內(nèi)；壞死的組織聚集形成大量的電子密度較高的黑化顆粒。腸道絨毛膜上皮細胞壞死、脫落，僅留下殘存的固有層基質(zhì)，充斥著大量的組織碎片和細菌顆粒（圖2b）；嚴重者，腸道絨毛膜組織大面積脫落，導致腸壁變薄。肌原纖維受損、萎縮，導致肌束間間隙增大，部分組織出現(xiàn)崩解現(xiàn)象。經(jīng)過多種組織的觀察，未發(fā)現(xiàn)病毒粒子的存在。
圖2，對蝦“玻璃苗”病理特征 a：蝦苗HE染色，肝胰腺大面積壞死，呈現(xiàn)玻璃化病變（實心箭頭）；b：超微病理觀察，前腸絨毛膜周圍有大量細菌（空心箭頭） 03、“玻璃苗”的防控策略 通過對河北省滄州市五家不同區(qū)位苗種場蝦苗的細菌分離鑒定分析，表明新喀里多尼亞弧菌（Vibrio neocaledonicus）和溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）檢出率和優(yōu)勢度最高；同時，這兩種弧菌均對凡納濱對蝦的PL5、PL20仔蝦以及幼蝦有很強的致病性，并可出現(xiàn)自然發(fā)病的典型癥狀；超微病理檢測也未發(fā)現(xiàn)病毒粒子的存在，由此排除了滄州地區(qū)發(fā)生的對蝦“玻璃苗”由病毒感染引起的可能性。綜上所述，初步判定對蝦“玻璃苗”為細菌性感染引發(fā)的流行性疾病，命名為“蝦苗細菌性�；Y”（Shrimp Postlarva Bacterial Vitrified Syndrome，BVS）。 按照細菌性致病原的疾病特性，以生物安保為指導，提出通過選購SPF親蝦、加強苗種檢疫、減少長距離苗種運輸、做到提前預防、高效治療等防控理念，以期實現(xiàn)對BVS的有效防治，其具體措施如下： �。�1）選購SPF親蝦：通過培育或選購SPF親蝦進行苗種繁育，可有效阻斷病原的垂直傳播途徑，降低苗種對特定病原的攜帶，有助于提高后期標苗和養(yǎng)殖過程中對蝦的成活率。 （2）加強苗種檢疫力度：結(jié)合區(qū)域內(nèi)對蝦“玻璃苗”發(fā)生情況和苗種溯源調(diào)查，嚴格檢測外來苗種特定病原及可培養(yǎng)病原菌的攜帶情況，并在苗種入池前進行病原消殺工作。 （3）減少長距離苗種運輸：苗種長距離運輸不僅會加大苗種應激反應，降低苗種存活率，同時也加快了病原在南北方、不同區(qū)域間的傳播速度。通過近距離運輸或繁育本地苗種，不僅加強苗種對本地環(huán)境的適應能力，同時降低折損率和運輸成本。 （4）防止病原交叉污染：做好進水、排水系統(tǒng)的管理，避免進水和排水系統(tǒng)的交叉污染；在水質(zhì)管理上，不僅做到水質(zhì)達標，更重要的是對有害微生物的嚴格消殺，防止含有病原菌的外源水或池水在不同養(yǎng)殖區(qū)域的相互串通；同時，做好養(yǎng)殖器具的消殺和專池專用，以降低病原的交叉性傳染風險。 �。�5）實現(xiàn)疾病的高效防治：針對特定病原研發(fā)專用防治技術手段，在養(yǎng)殖水體中使用過硫酸氫鉀、聚六亞甲基胍等控制池水的細菌總量，并采用專用口服藥物“玻立凈”、“復合抗菌肽”等進行蝦體內(nèi)有害菌的控制。同時，定期檢測水體和蝦體中有害菌數(shù)量，評估蝦體健康狀況和疾病發(fā)生風險，及時做到對疾病發(fā)生的預警預報和有效防控。 玻璃苗現(xiàn)象已在全國沿海普遍發(fā)生并對產(chǎn)業(yè)造成巨大的創(chuàng)傷。面對這一產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀，我們亟需從流行病學角度出發(fā)，全面調(diào)查了解多地苗種產(chǎn)區(qū)的致病原種類是否相同，同時建立快速檢測技術，查明病原的傳播途徑；另外，建立一套既實用且高效的疾病防控技術是其重中之重，為徹底解決苗種細菌性�；Y提供技術支撐和參考。 |
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