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水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留快速檢測技術(shù)現(xiàn)狀與突破

2019-10-22 16:53| 發(fā)布者: 御城雪| 查看: 71708| 評論: 0|原作者: 廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司 李斌、梁科|來自: 中國水產(chǎn)頻道

摘要: 中國水產(chǎn)頻道報道,水產(chǎn)品在我國動物產(chǎn)品消費中始終占有重要位置,消費份額較大,全國人均水產(chǎn)品消費約占豬牛羊肉消費量的一半。
  中國水產(chǎn)頻道報道,

  水產(chǎn)品在我國動物產(chǎn)品消費中始終占有重要位置,消費份額較大,全國人均水產(chǎn)品消費約占豬牛羊肉消費量的一半。目前國內(nèi)市場的水產(chǎn)品主要以鮮活為主,伴隨國民生活水平的提升,對水產(chǎn)品需求量也在逐年增加,也促使了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展,但同時也引起了不少的質(zhì)量安全問題。養(yǎng)殖戶為了有效的預(yù)防魚類的疾病,增加產(chǎn)量,會偷偷的非法使用禁用藥物,加之操作不規(guī)范,會導(dǎo)致水產(chǎn)品質(zhì)量下降,如果人食用了藥物超標(biāo)的水產(chǎn)品,嚴(yán)重的會有生命危險。目前水產(chǎn)質(zhì)量安全問題已日益突出,引起了政府和人們的廣泛關(guān)注。因此,解決水產(chǎn)中禁用藥物的快速檢測問題也是迫在眉睫。水產(chǎn)品的質(zhì)量安全是全國人民享有健康生活的重要保障,而水產(chǎn)品中違禁藥物的殘留是當(dāng)前危害最嚴(yán)重的因素之一,孔雀石綠是其中最具有代表性的一種。
  
  2014年9月,深圳特區(qū)布吉海鮮市場開展了一次名為“清水行動”的水產(chǎn)品專項執(zhí)法監(jiān)督抽查。在這次行動中,執(zhí)法部門共抽檢了43家水產(chǎn)品經(jīng)營戶,共抽取樣品121份,其中淡水魚樣品90份。經(jīng)檢測,發(fā)現(xiàn)7個水產(chǎn)品樣品檢測不合格(其中孔雀石綠超標(biāo)5個,硝基呋喃代謝物超標(biāo)2個);2016 年底,國內(nèi)媒體“熱搜”的北京超市“活魚下架事件”,社會普遍認(rèn)為與孔雀石綠等的濫用有關(guān);2019年4月,省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳委托山東省水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗中心對臨朐縣水產(chǎn)品進行了質(zhì)量安全抽檢,被抽檢的6個鱘魚樣品檢驗呈陽性,檢驗結(jié)果結(jié)果為孔雀石綠含量超標(biāo);同年6月,杭州市消保委對本志7家買菜類APP進行消費評測,結(jié)果為杭州美團、叮咚買菜的鱖魚、天津永輝超市草魚被檢出孔雀石綠超標(biāo)。由此可見,孔雀石綠殘留問題已成為一個日益突出的食品安全問題。
  
  什么是孔雀石綠?
  
  孔雀石綠作為染色劑,用于皮革業(yè)、紡織業(yè)、制陶業(yè)、食品和生物的染色,是人工合成的三苯甲烷類化學(xué)物。同時,孔雀石綠也可以用作殺菌劑,驅(qū)蟲劑,用于預(yù)防與治療水生動物細(xì)菌、真菌和寄生蟲的感染,由于其成本低,效果顯著,所以被普遍用在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中。然而隨著研究的深入,孔雀石綠的高毒性,高殘留的性質(zhì)及潛在的致畸、致癌、致突變等毒副作用倍受大家的關(guān)注。鑒于其潛在的致癌性,美國、加拿大、日本、歐盟等許多國家將其 列為水產(chǎn)殖禁用藥物。歐盟法案2002/675/EC規(guī)定,動物源性食品中MG和LMG殘留總量限制為2μg/kg;日本的肯定列表明確規(guī)定在進口水產(chǎn)品中不得檢出MG殘留。我國于2002年5月將孔雀石綠 列入《食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單》中,于2005年制定了孔雀石綠的使用標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定在水產(chǎn)品中,MG 和LMG的殘留總限量不得超1 μg/kg。 但違規(guī)使用孔雀石綠的事件時有發(fā)生,如歐盟、日本、中國香港等國家和地區(qū)曾從我國大陸進口的鰻魚中檢出MG及LMG殘留,不僅影響生態(tài)環(huán)境,還成為影響我國食品質(zhì)量安全和國際市場競爭力的重要因素。
  
  檢測技術(shù)的應(yīng)用
  
  孔雀石綠進入動物體內(nèi)后會快速代謝為無色孔雀石綠,無色孔雀石綠為脂溶性物質(zhì),相較孔雀石綠而言毒性更強,基本無法代謝。國內(nèi)外均以孔雀石綠和其代謝物無色孔雀石綠的總量為測定指標(biāo),目前測定方法主要有儀器分析測定(高效液相、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用等)、免疫學(xué)檢測技術(shù)(酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)、膠體金檢測技術(shù)等)和微光探測與免疫學(xué)技術(shù)的結(jié)合(熒光定量檢測技術(shù))。從快速篩查市場而言,后兩種方法已逐漸成為檢測市場的主流。
  
  1. 儀器分析法
  
  主要是指利用氣相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法或各類光譜儀等大型精密儀器來進行藥物殘留的分析方法。此類方法是一種準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性好、選擇性強的檢測方法,現(xiàn)普遍用于檢測獸藥和農(nóng)藥殘留,許多國家和地區(qū)已將高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為檢測孔雀石綠殘留的確證方法。但此方法需要昂貴的儀器和專業(yè)的技術(shù)人員操作,且無法實現(xiàn)大批量快速檢測,相對成本較高,不具備現(xiàn)場快速篩查的優(yōu)勢。
  
  2. 免疫學(xué)檢測技術(shù)
  
  免疫學(xué)檢測技術(shù)是利用抗原抗體的特異性結(jié)合的原理,相對儀器分析法而言,具有的最大優(yōu)勢為操作便捷,利于市場的快速篩查,F(xiàn)階段,食品安全的快速檢測技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)和膠體金檢測技術(shù)。
  
  2.1 酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)
  
  其原理是應(yīng)用抗原和抗體的特異結(jié)合與酶催化作用的有機結(jié)合,利用酶促反應(yīng)原理有較的放大了免疫檢測的效果,具有較高的靈敏度,同時還具備了定量檢測的特性。酶免檢測技術(shù)的優(yōu)點是檢測靈敏度高、特異性好、高通量和高精密度的特點,且無需大型儀器設(shè)備,可進行大批量的樣品初篩檢測。雖然酶免較儀器法具有一定的優(yōu)勢,但由于其檢測時需專業(yè)人員操作,檢測時間較長,同樣也無法滿足現(xiàn)場快速篩查的需求。
  
  2.2 膠體金檢測技術(shù)
  
  膠體金檢測技術(shù)是以納米金顆粒作為示蹤標(biāo)識物,應(yīng)用抗原和抗體具有特異性結(jié)合的原理所建立的新型免疫標(biāo)記技術(shù),是色譜層析技術(shù)和納米金技術(shù)的有機結(jié)合。膠體金檢測技術(shù)的優(yōu)點就是操作簡單、檢測時間短和無需專業(yè)技術(shù)人員操作。因為這些特性,使得膠體金技術(shù)廣泛應(yīng)用于大分子類蛋白、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、小分子類藥物和毒素類等的快速檢測中。雖然膠體金法具有一定的優(yōu)勢,但由于其較差的靈敏度,無法滿足國家檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求,加大了漏檢的風(fēng)險。
  
  3. 微光探測與免疫學(xué)技術(shù)的結(jié)合
  
  隨著各類學(xué)科交叉的不斷深入,現(xiàn)代快速檢測技術(shù)越來越趨向于便攜、操作簡單快捷、檢測結(jié)果即時準(zhǔn)確的方向發(fā)展,使得開發(fā)出的相應(yīng)產(chǎn)品具有極大的市場潛力,而熒光定量檢測技術(shù)就是食品安全快速檢測市場中最具代表性的新型檢測方法。此方法是免疫學(xué)技術(shù)、色譜層析技術(shù)、生物探針技術(shù)和微光探測技術(shù)的有機結(jié)合,兼具儀器分析法、酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)、膠體金檢測技術(shù)的優(yōu)點,取長補短,在保持儀器法高精確性的同時還保留了膠體金法檢測的快速、簡便和酶免技術(shù)的高靈敏度、可定量的特點。
  
  孔雀石綠檢測技術(shù)的發(fā)展
  
  孔雀石綠的殘留主要體現(xiàn)在水產(chǎn)品中,特別是在高油酯的魚類中尤為明顯,所以針對孔雀石綠的檢測對象主要為可食用組織,我國根據(jù)此種情況也建立了孔雀石綠在可食用性組織中的國家檢測標(biāo)準(zhǔn),但由于其需要昂貴的儀器和復(fù)雜的樣本處理過程,使得在現(xiàn)場快速篩查和基層執(zhí)法部門中無法大量推廣。在快速檢測產(chǎn)品中,孔雀石綠酶免試劑盒最早進入快篩市場,但由于其繁瑣的操作過程,很快被膠體金產(chǎn)品所取代?兹甘G膠體金產(chǎn)品雖然檢測速度快,只需30-45分鐘,但膠體金較差的靈敏度,也增加了漏檢的風(fēng)險;同時,組織類的樣本前處理依然復(fù)雜、費時,存在著離心、吹干等步驟,不僅增加了人力成本,也使得在吹干大量溶劑時,嚴(yán)重污染了環(huán)境。對于吹干的問題,市場一直在尋求解決的方法,近年來市場上推出的SPE產(chǎn)品就是對吹干這一步驟的優(yōu)化處理。SPE方法的優(yōu)點是省略了吹干環(huán)節(jié),使得處理速度有了一定的提升,但同樣存在著一些不足:1、步驟和儀器未得到省略,離心及相應(yīng)的儀器仍需使用,吹干步驟換成了過SPE柱,同時也增加了固相萃取儀;2、增加了成本,SPE柱成本較高,約增加20-40%;3、浪費溶劑,吸附和洗脫時均需大量試劑;4、洗脫效率不穩(wěn)定等。
  
  針對目前快速檢測方法仍然存在的問題,我司經(jīng)過了長時間的技術(shù)攻關(guān),結(jié)合高分子納米材料和免疫層析卡的優(yōu)點,開發(fā)了全新的孔雀石綠殘留快速檢測卡,并結(jié)合先進的專利數(shù)據(jù)采集技術(shù),國內(nèi)外首創(chuàng)地研制出了全新的孔雀石綠FST快速前處理方案(包含膠體金和熒光層析系列產(chǎn)品),較傳統(tǒng)的檢測產(chǎn)品相比,檢測效率提高兩倍以上,靈敏度更優(yōu),精密性更好,智能化更高。產(chǎn)品如下圖:
  
  FST快速前處理方案
  
  FST的技術(shù)理念基于組織類樣本的快速、便捷的前處理方案,是我司專門為解決繁瑣的組織類樣本前處理而開發(fā)的,是組織類樣本POCT技術(shù)的一大突破,為國內(nèi)外首創(chuàng)。其特點是省略了離心、吹干或上萃取柱步驟,實驗全程只需一把移液器即可完成,極大縮短了樣本檢測時間。
  
  目前,我司的FST系列產(chǎn)品包括兩大類:FST-膠體金和FST-熒光層析。孔雀石綠FST-膠體金產(chǎn)品在保持同類市場的高靈敏度的前提了,把組織類的樣本處理進行了極簡化處理,處理時間從常規(guī)的25-40分鐘縮短為 10分鐘以內(nèi),整個檢測過程無需任何輔助儀器,極大的節(jié)省了人力和物力成本,且此類產(chǎn)品順利通過了2018年的農(nóng)業(yè)部驗證和2019年的廣東省快檢驗證。
  
  孔雀石綠FST-膠體金產(chǎn)品雖然在性能上有了很大提升,但其不能定量的不足也始終無法解決,針對這一難點,我司專門開發(fā)FST-熒光層析系列產(chǎn)品?兹甘GFST-熒光層析產(chǎn)品結(jié)合了高分子納米技術(shù)和微光探測技術(shù),是在FST-膠體金產(chǎn)品性能上的進一步提升,具有靈敏度高(可達液相質(zhì)譜的靈敏度要求)、樣本處理快速(縮短為5分鐘以內(nèi))、抗干擾能力更強(大稀釋比例降低了樣本對產(chǎn)品的干擾)、半定量的檢測(檢測結(jié)果以數(shù)據(jù)顯示)、數(shù)據(jù)即時處理(數(shù)據(jù)即時存儲或打。┑葍(yōu)勢。孔雀石綠FST-熒光層析產(chǎn)品順利通過了2018年農(nóng)業(yè)部驗證,為全場時間最快,檢測靈敏度最高的快速檢測產(chǎn)品。為了更好的區(qū)分現(xiàn)有市場中主流檢測產(chǎn)品間的差異,下表針對參加2018年農(nóng)業(yè)部驗證的相關(guān)技術(shù)產(chǎn)品做了簡單的技術(shù)比較:

  結(jié)論與展望
  
  水產(chǎn)品是國民餐桌上的重要組成,國家政府也一直致力于解決食品的安全問題,近年來更是針對水產(chǎn)品的藥物殘留加大了抽檢力度,而孔雀石綠一直是人民關(guān)注的重點,但由于現(xiàn)有檢測技術(shù)的樣本前處理較繁瑣,使得抽檢率無法大幅提升。因此,隨著政府的進一步加強,快篩市場對現(xiàn)有檢測技術(shù)也必將提出更高的要求?焖、便捷、準(zhǔn)確、智能化等一直是快速檢測的重要需求,而我司的FST前處理技術(shù)恰巧是對這一需求的極大補充。隨著FST技術(shù)的進一步發(fā)展,相信對監(jiān)管孔雀石綠的濫用具有重要意義。
  


  【關(guān)鍵字】:孔雀石綠  水產(chǎn)品  檢測  水產(chǎn)養(yǎng)殖
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