聚合貼17|蛭弧菌—弧菌的天敵？

漁歌子

一、蛭弧菌的定義和簡(jiǎn)介

    蛭弧菌是寄生于其他細(xì)菌并能導(dǎo)致其裂解的一類(lèi)細(xì)菌。它雖然比通常的細(xì)菌小，能通過(guò)細(xì)菌濾器，有類(lèi)似噬菌體的作用，但它不是病毒，確確實(shí)實(shí)是一類(lèi)能"吃掉"細(xì)菌的細(xì)菌。1962年首次發(fā)現(xiàn)于菜豆葉燒病假單胞菌體中，隨后從土壤、污水中都分離到了這種細(xì)菌。根據(jù)其基本特性，命名為Bdellovibriobacteriovorus。其中，"Bdello"一詞來(lái)自希臘字,是"水蛭"的意思，"vibrio"意為"弧菌"，而種名"bacteriovorus"是"食細(xì)菌"的意思。由于它們具有特殊的捕食生活方式以及有可能充當(dāng)決定自然界中微生物種群變動(dòng)的角色，因而引起了許多科學(xué)工作者的興趣。





　　中文學(xué)名蛭弧菌拉丁學(xué)名Bdellovibrio界細(xì)菌界門(mén)變形細(xì)菌門(mén)綱δ變形菌綱目蛭弧菌目科蛭弧菌科屬蛭弧菌屬


     蛭弧菌(Bdellovibrio)是寄生于其他細(xì)菌并能導(dǎo)致其裂解的一類(lèi)細(xì)菌。它雖然比通常的細(xì)菌小，能通過(guò)細(xì)菌濾器，有類(lèi)似噬菌體的作用，但它不是病毒，確確實(shí)實(shí)是一類(lèi)能"吃掉"細(xì)菌的細(xì)菌。1962年首次發(fā)現(xiàn)于菜豆葉燒病假單胞菌體中，隨后從土壤、污水中都分離到了這種細(xì)菌。根據(jù)其基本特性，命名為Bdellovibriobacteriovorus。其中，"Bdello"一詞來(lái)自希臘字,是"水蛭"的意思，"vibrio"意為"弧菌"，而種名"bacteriovorus"是"食細(xì)菌"的意思。由于它們具有特殊的捕食生活方式以及有可能充當(dāng)決定自然界中微生物種群變動(dòng)的角色，因而引起了許多科學(xué)工作者的興趣。

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二、蛭弧菌特征

　　蛭弧菌屬于蛭弧菌科。相差顯微鏡觀(guān)察表明，它具有細(xì)菌的一切形態(tài)特征：?jiǎn)渭?xì)胞，弧形或逗點(diǎn)狀，有時(shí)呈螺旋狀。大小為0.3-0.6×0.8-1.2微米，或僅為桿菌長(zhǎng)度的1/3-1/4。端生鞭毛很少多于一根，有的在另一端生有一束纖毛。水生蛭弧菌的鞭毛還具鞘膜，它是細(xì)胞壁的延伸物，并包圍著鞭毛絲狀體，所以比其他細(xì)菌的鞭毛粗3-4倍，這是一個(gè)很顯著的特點(diǎn)。蛭弧菌運(yùn)動(dòng)活躍，革蘭氏染色陰性。細(xì)胞中蛋白質(zhì)含量較高，有的占干重的60-70%。DNA含量5%，GC百分?jǐn)?shù)為42-51。據(jù)報(bào)導(dǎo)，蛭弧菌DNA的合成是在宿主細(xì)胞DNA完全裂解后進(jìn)行，宿主細(xì)胞中80%的DNA都并到寄生菌中去了，其機(jī)制還不很清楚。

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三、蛭弧菌生活方式


　　蛭弧菌生活方式多樣，有寄生型，也有兼性寄生，極少數(shù)營(yíng)腐生。寄生型必須在生活宿主細(xì)胞或在有其提取物中得到營(yíng)養(yǎng)或生長(zhǎng)因子時(shí)才能生長(zhǎng)繁殖，并表現(xiàn)出嚴(yán)格的特異性；非寄生型營(yíng)腐生生活，或者至少是兼性腐生，可在蛋白胨和酵母提取物培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，它們中絕大多數(shù)都喪失了寄生性，只有十幾分之一可恢復(fù)寄生性。實(shí)驗(yàn)表明，從自然界分離得到的蛭弧菌都是依賴(lài)寄生型，迄今為止，還沒(méi)有直接從自然界分離得到非寄生型。不依賴(lài)宿主的蛭弧菌，只能生活在實(shí)驗(yàn)室條件下。故有人認(rèn)為，兼性或腐生型均由寄生型蛭弧菌衍化而來(lái)，有人稱(chēng)它為"突變型"。

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四、蛭弧菌生長(zhǎng)要求


　　寄生型蛭弧菌生長(zhǎng)，要求pH6.0-8.5；溫度23-37℃，低于12℃，高于42℃時(shí)均不生長(zhǎng)；能穩(wěn)定分解蛋白質(zhì)，一般不利用碳水化合物，而以肽、氨基酸作碳源和能源；能液化明膠；嚴(yán)格好氧；在人工培養(yǎng)基上則產(chǎn)生黃色色素，細(xì)胞色素a、b、c，還能產(chǎn)生各格酶類(lèi)。其中有宿主細(xì)胞有關(guān)。

　　

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五、蛭弧菌生活史


　　蛭弧菌的生活史有兩個(gè)階段。既有自由生活的、能運(yùn)動(dòng)、不進(jìn)行增殖的形式；又有在特定宿主細(xì)菌的周質(zhì)空間內(nèi)進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖的形式。這兩種形式交替進(jìn)行。

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六、蛭弧菌工作機(jī)理




　　


　　蛭弧菌侵入宿主細(xì)菌的方式十分獨(dú)特。開(kāi)始時(shí)，它以很高的速度(每秒高達(dá)100個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)度)猛烈碰撞宿主細(xì)胞，無(wú)鞭毛端直接附著于宿主細(xì)胞壁上，然后，菌體以100轉(zhuǎn)/秒以上的轉(zhuǎn)速產(chǎn)生一種機(jī)械"鉆孔"效應(yīng)，加上蛭弧菌入侵時(shí)的收縮而進(jìn)入宿主細(xì)胞的周質(zhì)空間。從"鉆孔"到進(jìn)入只需幾秒鐘便可完成。在吸附至侵入開(kāi)始前的5-10分鐘，宿主細(xì)胞出現(xiàn)卷曲現(xiàn)象，這可能因?yàn)轵位【�產(chǎn)生的胞壁酸酶等使之轉(zhuǎn)化為球質(zhì)體的緣故。


　　如果很多蛭弧菌同時(shí)沖擊一個(gè)宿主細(xì)胞，可能在其未侵入前，宿主細(xì)胞壁就已潰溶掉。至于真正的原因，目前還不清楚。蛭弧菌侵入周質(zhì)空間的同時(shí)失去鞭毛，受到感染的宿主細(xì)胞也開(kāi)始膨脹，變?yōu)橐粋�(gè)對(duì)滲透壓并不敏感的球形體。此稱(chēng)"蛭弧體"。這時(shí)，"蛭弧體"增長(zhǎng)，比原本大幾倍，然后均稱(chēng)地分裂，形成許多帶鞭毛的個(gè)體——子代細(xì)胞。隨著細(xì)胞的增殖和某些酶的產(chǎn)生，宿主細(xì)胞壁進(jìn)一步瓦解，子代蛭弧菌釋放出來(lái)。完成這一生活周期約需4小時(shí)(圖2-83)。子代細(xì)胞遇到敏感宿主又可重新侵染，開(kāi)始下一個(gè)循環(huán)。


　　近年發(fā)現(xiàn)，有的蛭弧菌在某種情況下還可進(jìn)入到宿主細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中，立即生長(zhǎng)繁殖。這一發(fā)現(xiàn)，有待進(jìn)一步證實(shí)。

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七、蛭弧菌侵入對(duì)象


　　蛭弧菌與宿主細(xì)胞之間，常表現(xiàn)出一定的特異性。不過(guò)，有的特異性較差，能侵入多種細(xì)菌。例如不同的蛭弧菌菌株，能侵入各類(lèi)不同的植物病原菌。


　　蛭弧菌在人的某些病原菌體中也已發(fā)現(xiàn)，藻類(lèi)和某些農(nóng)業(yè)致病真菌細(xì)胞中亦有它分布。這些蛭弧菌的溶菌作用，對(duì)于控制農(nóng)業(yè)及人畜病原微生物，無(wú)疑是有價(jià)值的。雖然蛭弧菌可使一些細(xì)菌遭受毀滅性裂解，然而，它本身的命運(yùn)同樣遭受到另一類(lèi)小生物的威脅。1970年首次發(fā)現(xiàn)了蛭弧菌噬菌體(bdellophage)，它們對(duì)寄生或非寄生兩種類(lèi)型的蛭弧菌均有裂解作用。不過(guò)，專(zhuān)一性嚴(yán)格，只對(duì)一定的種株作用，并有自己的裂解過(guò)程。


　　當(dāng)蛭弧菌直接附著于宿主細(xì)胞之前，或者在完成侵入宿主細(xì)胞周質(zhì)以前，蛭弧菌噬菌體的尾部首先附著在蛭弧菌細(xì)胞上，然后該噬菌體將核酸注入蛭弧菌菌體中，于是完成了它的入侵過(guò)程，而噬菌體頭部，完全以空殼保留在蛭弧菌細(xì)胞之外，被感染了噬菌體的蛭弧菌，其形態(tài)、大小不變，噬菌體卻在細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制。與此同時(shí)，蛭弧菌本身仍在宿主細(xì)菌的周質(zhì)中，以二均分裂的方式繁殖，其結(jié)果，蛭弧菌的宿主細(xì)胞裂解，蛭弧菌噬菌體的子代也隨之被釋放出來(lái)。至于噬菌體如何通過(guò)蛭弧菌宿主釋放于體外，實(shí)質(zhì)性的機(jī)制還不清楚。


　　實(shí)驗(yàn)證明：在宿主細(xì)菌-蛭弧菌-蛭弧菌噬菌體之間，已構(gòu)成了一種獨(dú)特的"三位一體"的寄生系統(tǒng)(圖2-84)。它們之間的相互作用，或許發(fā)生在自然生態(tài)系統(tǒng)之中，也可能是另一種情況，即蛭弧菌噬菌體的天然宿主是非寄生型蛭弧菌，或者以溶源狀態(tài)天然存在，通過(guò)某種誘導(dǎo)因子的作用而得到發(fā)展。如果真是這樣，無(wú)疑對(duì)其宿主是個(gè)威脅。

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八、蛭弧菌分布和分離


　　蛭弧菌廣泛存在于自然界，土壤、河水、附近海洋水域及下水道污水中都有分布，干凈的井水、泉水中找不到它們的存在。一般污水中含菌數(shù)105個(gè)/毫升，下水道污水中可含菌數(shù)萬(wàn)個(gè)/毫升，土壤中含菌數(shù)103-5個(gè)/克。怎樣檢查和分離蛭弧菌呢?多少需要借鑒細(xì)菌病毒研究中所使用的方法。即將蛭弧菌與敏感菌混合倒平板，在適宜條件下培養(yǎng)2-3天，平板上便會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似噬菌體的噬菌斑，并逐漸擴(kuò)大，宿主細(xì)胞完全被溶解而形成透明區(qū)。從這些透明區(qū)中就可分離到蛭弧菌。利用這一特征，還可計(jì)算出蛭弧菌噬菌體的數(shù)目。同時(shí)可追蹤增殖過(guò)程、寄生潛伏時(shí)間、新產(chǎn)生蛭弧菌的數(shù)量以及它們的活性等。例如蛭弧菌噬菌體殺死宿主細(xì)胞而不產(chǎn)生噬菌斑，遇到這種情部，用此法就較困難。如果要從土壤中分離蛭弧菌，應(yīng)將少量樣品先制成懸浮液，經(jīng)濾膜過(guò)濾，以截留大的細(xì)菌，讓小的蛭弧菌通過(guò)，取濾液進(jìn)行分離。


　　蛭弧菌不僅宿主范圍廣泛，加之特殊的生活方式，使之具有生態(tài)學(xué)優(yōu)勢(shì)。其一，蛭弧菌進(jìn)入到其他細(xì)菌的周質(zhì)空間，可以確保營(yíng)養(yǎng)需要，不依賴(lài)外界的來(lái)源。因此，即使在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)很少的地方，諸如海洋、江河、湖泊等生態(tài)系統(tǒng)中也能生長(zhǎng)；其二，周質(zhì)內(nèi)的環(huán)境是一個(gè)無(wú)競(jìng)爭(zhēng)的小生境。這對(duì)生長(zhǎng)緩慢的蛭弧菌無(wú)疑是個(gè)很有利的條件；另外，周質(zhì)空間被一個(gè)穩(wěn)定的、堅(jiān)強(qiáng)的細(xì)胞壁所包圍，有似大分子不能通過(guò)，即使小分子也不易透過(guò)，這就為蛭弧菌提供了一個(gè)保護(hù)性環(huán)境。

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九、蛭弧菌應(yīng)用價(jià)值


　　由于上述特性，使蛭弧菌具有很大的潛在應(yīng)用價(jià)值，很可能成為生物防治有害細(xì)菌的一種有力武器，首先，它有可能用于凈化水體和清除工、農(nóng)、醫(yī)等方面的有害細(xì)菌。在農(nóng)業(yè)上，有人將水生蛭弧菌跟引起水稻白葉枯病的黃桿菌混合在一起，加入農(nóng)田灌溉水中，由于蛭弧菌以黃桿菌為"食料"，使灌溉水中該致病菌大大減少。對(duì)大豆痘病、柑桔潰瘍病、棉花凋萎病的致病菌也具較強(qiáng)的侵染力，因而它可能成為人類(lèi)與農(nóng)業(yè)致病進(jìn)行斗爭(zhēng)的有力武器。在醫(yī)學(xué)上，有的蛭弧菌對(duì)傷寒桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌等人畜致病菌也有很強(qiáng)的裂解作用。例如，有人用蛭弧菌有效地防治了由弗氏志賀氏菌引起的兔角質(zhì)結(jié)膜炎和腸道疾病。蛭弧菌的防治作用，或者防止感染，或者明顯地減少疾病的持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度。當(dāng)用蛭弧菌和志賀氏菌混合接種時(shí)，在腸中的志賀氏菌的數(shù)量大幅度減少。然而，給動(dòng)物強(qiáng)行喂養(yǎng)蛭弧菌則未獲得成功效果；第二，這類(lèi)細(xì)菌大量存在于污水中，對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌屬的細(xì)菌均有廣泛的寄生性，因此，有人以蛭弧菌作為水域污染程度的一項(xiàng)最終指標(biāo)(一般是以大腸桿菌的含菌數(shù)/毫升作為水源污染的指標(biāo))。


　　值得注意的是：它對(duì)一些有益的細(xì)菌如固氮菌等亦有裂解作用。在理論研究中，蛭弧菌同樣具有十分重要的意義。特別是宿主細(xì)菌-蛭弧菌-蛭弧菌噬菌體這個(gè)"三位一體"的寄生系統(tǒng)，更引人注目。因?yàn)檫@一系統(tǒng)充滿(mǎn)了"你死我活"的矛盾和斗爭(zhēng)，優(yōu)勝者得對(duì)生存和發(fā)展，失敗者遭致危害和毀滅。人們可以通過(guò)這一系統(tǒng)，從正反兩個(gè)方面去研究的利用"生命之戰(zhàn)"的拮抗體系為人類(lèi)服務(wù)。例如，蛭弧菌對(duì)宿主細(xì)胞周質(zhì)空間的高度適應(yīng)力的致死力，不論對(duì)致病的有害細(xì)菌還是非致病的有益細(xì)菌都是相等的。這一現(xiàn)象給我們提出了一系列的問(wèn)題：它們的適應(yīng)力和致死活力是否有著共同的作用機(jī)制?這種作用受何因子控制......?弄清這些問(wèn)題，對(duì)于廣泛應(yīng)用將起到更大的指導(dǎo)作用。

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十、噬菌蛭弧菌在蝦蟹健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用

     我國(guó)是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國(guó)，多年來(lái)蝦蟹產(chǎn)量居世界之首。然而，隨著蝦蟹養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，水質(zhì)污染越來(lái)越嚴(yán)重，導(dǎo)致蝦蟹發(fā)病與死亡的損失也愈加觸目驚心，水質(zhì)污染與病害發(fā)生已經(jīng)成為制約蝦蟹健康養(yǎng)殖可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。據(jù)研究與調(diào)查統(tǒng)計(jì)表明，水質(zhì)污染已經(jīng)對(duì)蝦蟹生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖及其產(chǎn)量與產(chǎn)品品質(zhì)產(chǎn)生了重要的不良影響，還導(dǎo)致了生物多樣性的降低；我國(guó)蝦蟹每月平均發(fā)病率和死亡率分別約高達(dá)14.03%-23.93%和3.92%-23.79%，由此造成的直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)49.50億元。因此，如何進(jìn)行有效的養(yǎng)殖水體水質(zhì)與病害控制無(wú)疑是蝦蟹健康養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展所面臨的巨大挑戰(zhàn)。
　　
　　目前，利用微生物進(jìn)行水質(zhì)處理與病害防治業(yè)已證明是一種綠色環(huán)保、有效的病害防治技術(shù)與方法，在國(guó)內(nèi)外均有較多的報(bào)道。其中噬菌蛭弧菌作為一種具有先天獨(dú)特噬菌特性的寄生性細(xì)菌，在蝦蟹病害防治中逐漸嶄露頭角，已經(jīng)成為蝦蟹健康養(yǎng)殖的“新秀”。本文從噬菌蛭弧菌的噬菌機(jī)理入手，進(jìn)一步闡明了噬菌蛭弧菌作為一種新型生防菌劑所具有的獨(dú)特功效，以期加深我國(guó)蝦蟹養(yǎng)殖者對(duì)噬菌蛭弧菌的認(rèn)識(shí)，加快噬菌蛭弧菌制劑在我國(guó)蝦蟹健康養(yǎng)殖應(yīng)用中的推廣進(jìn)程。
　　
　　一、噬菌蛭弧菌是一種具有先天獨(dú)特噬菌特性的獵食性細(xì)菌
　　
　　自德國(guó)學(xué)者Stolp和Petzold（1962年）首次在德國(guó)的土壤中發(fā)現(xiàn)了這種以寄生和裂解細(xì)菌為生的噬菌蛭弧菌以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼對(duì)其噬菌機(jī)理展開(kāi)了研究。迄今已經(jīng)證實(shí)，噬菌蛭弧菌對(duì)病原菌的作用方式為“穿入、穩(wěn)定、裂解”模型，即噬菌蛭弧菌首先通過(guò)化學(xué)趨避性識(shí)別并吸附宿主細(xì)菌，然后通過(guò)酶解和機(jī)械鉆孔等一系列反應(yīng)，進(jìn)入宿主細(xì)菌的質(zhì)壁空間或細(xì)胞質(zhì)，對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行一系列的修飾與改造，同時(shí)進(jìn)行自身生物大分子合成，最終分裂形成子代蛭弧菌并釋放到宿主細(xì)胞外。
　　
　　近年來(lái)，為了在基因與蛋白質(zhì)水平深入探索噬菌蛭弧菌的噬菌機(jī)理，Beck、Barel等學(xué)者（2005）研究了噬菌蛭弧菌在宿主體內(nèi)增殖時(shí)產(chǎn)生的蛋白與一些潛在的功能基因，發(fā)現(xiàn)外膜蛋白、蛋白酶基因很可能在其識(shí)別和裂解宿主菌的過(guò)程中起了非常重要的作用。這些研究為進(jìn)一步闡明噬菌蛭弧菌的噬菌機(jī)理奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　
　　二、噬菌蛭弧菌在蝦蟹健康養(yǎng)殖應(yīng)用中的獨(dú)特功效
　　
　　1、噬菌蛭弧菌對(duì)蝦蟹病原菌的殺菌范圍廣，噬菌效果顯著
　　
　　噬菌蛭弧菌與解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等分泌抗菌肽、依枯草菌素等抑菌物質(zhì)的生防細(xì)菌不同，它主要以機(jī)械鉆孔與酶解的方式破壞病原菌細(xì)胞壁，從而達(dá)到殺菌的效果。噬菌蛭弧菌的這種作用方式也決定了其殺菌范圍比其他生防細(xì)菌更為廣泛。
　　
　　大量研究結(jié)果表明，噬菌蛭弧菌幾乎能夠裂解蝦蟹常見(jiàn)的病原菌種類(lèi)。例如，楊淑專(zhuān)和黃慶輝（1997）研究了噬菌蛭弧菌對(duì)蝦蟹病原菌的寄生作用后表明，噬菌蛭弧菌對(duì)非01霍亂弧菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌、鰻弧菌、梅氏弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、氣單胞菌等共25株蝦蟹常見(jiàn)病原菌具有良好的噬菌活性。因此，通過(guò)向水體中潑灑噬菌蛭弧菌，可以廣泛降低水體中蝦蟹病原菌的種類(lèi)與數(shù)量，從而減少了蝦蟹細(xì)菌性病害的發(fā)生率。
　　
　　此外，噬菌蛭弧菌對(duì)病原菌的噬菌效果也極為顯著。楊莉等（2000）試驗(yàn)證實(shí)噬菌蛭弧菌能夠在5天使嗜水氣單胞菌含量下降103cfu/mL，在9天使嗜水氣單胞菌含量下降107cfu/mL。這些研究表明噬菌蛭弧菌消除致病菌的效率高，為進(jìn)一步在蝦蟹細(xì)菌性病害防治上推廣應(yīng)用提供了重要的臨床試驗(yàn)依據(jù)。
　　
　　2、噬菌蛭弧菌噬菌條件較為寬松，適應(yīng)蝦蟹養(yǎng)殖水體環(huán)境能力強(qiáng)
　　
　　蝦蟹養(yǎng)殖生長(zhǎng)的pH、溫度范圍與噬菌蛭弧菌的噬菌條件基本相同。據(jù)研究表明，目前分離的噬菌蛭弧菌菌株對(duì)pH、溫度等環(huán)境因子的要求并不嚴(yán)格，其噬菌條件范圍一般為pH6.5-8.6和4℃-37℃。例如，邵桂元等（1995）研究發(fā)現(xiàn)，噬菌蛭弧菌在4℃-37℃和pH6.0-8.0條件下對(duì)點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌有形成噬菌斑的能力；李戈強(qiáng)等（1998）試驗(yàn)也證明噬菌蛭弧菌在溫度10-35℃和pH6.5-8.6范圍內(nèi)對(duì)河流弧菌均有裂解作用，并進(jìn)一步指出在25-30℃和6.5-8.1范圍內(nèi)噬菌蛭弧菌對(duì)河流弧菌裂解活性最強(qiáng)。而且，Rice等（1998）試驗(yàn)也證實(shí)，水體中的天然細(xì)菌含量完全可以保持噬菌蛭弧菌的生長(zhǎng)。這些均說(shuō)明噬菌蛭弧菌對(duì)蝦蟹養(yǎng)殖水體環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)，對(duì)溫度和pH的適應(yīng)范圍較寬松。
　　
　　3、噬菌蛭弧菌能夠解決蝦蟹病原菌因出現(xiàn)耐藥性所導(dǎo)致的負(fù)面效應(yīng)
　　
　　耐藥性是指病原體在反復(fù)接觸抗病原體藥物后，其反應(yīng)不斷減弱，以至最后能夠抵抗藥物而不被殺滅或抑制的現(xiàn)象。耐藥性的產(chǎn)生除了遺傳因素外，主要與養(yǎng)殖過(guò)程中長(zhǎng)期使用某種藥物、用藥方法不當(dāng)以及病原體的異地傳播有關(guān)。病原菌耐藥性的產(chǎn)生，不僅會(huì)導(dǎo)致用藥量增加，提高養(yǎng)殖成本，而且還會(huì)造成環(huán)境與水產(chǎn)品污染，進(jìn)而危害人類(lèi)健康。
　　
　　研究表明，噬菌蛭弧菌是一種具有先天噬菌特性的寄生性細(xì)菌，其噬菌作用不因病原菌是否產(chǎn)生耐藥性而發(fā)生影響。本實(shí)驗(yàn)室曾觀(guān)察了噬菌蛭弧菌對(duì)耐沙拉沙星和新霉素的嗜水氣單胞菌的裂解作用，發(fā)現(xiàn)其對(duì)這些嗜水氣單胞菌耐藥菌株仍然具有良好的噬菌效果。因此，噬菌蛭弧菌是解決病原菌不斷產(chǎn)生耐藥問(wèn)題的最佳選擇之一。
　　
　　4、噬菌蛭弧菌具有水質(zhì)改良、增強(qiáng)免疫力與抗病菌感染三重功效
　　
　　噬菌蛭弧菌作為一種寄生性細(xì)菌，除了具有良好的噬菌效果外，經(jīng)研究證實(shí)還具有水質(zhì)改良、增強(qiáng)免疫力與抗病菌感染三重功效，這是任何一種益生菌與化學(xué)消毒劑所不能比擬的。張梁等（2005）研究了噬菌蛭弧菌對(duì)水質(zhì)影響后發(fā)現(xiàn)，噬菌蛭弧菌能夠顯著改善養(yǎng)殖環(huán)境中的主要化學(xué)指標(biāo)，具體表現(xiàn)在：向水中潑灑含量為5×104PFU/L的噬菌蛭弧菌制劑后，養(yǎng)殖水體的化學(xué)耗氧量、氨氮含量、硫化物含量分別下降了29.95%、33.87%和34.38%，溶解氧含量上升了12.43%；張呂平等（2009）研究進(jìn)一步指出噬菌蛭弧菌（3×105PFU/mL）抑制弧菌的效果明顯優(yōu)于二氯異氰尿酸鈉（0.3mg/L）和季銨鹽絡(luò)合碘（0.3 mg/L）。
　　
　　此外，徐琴等（2007）研究表明，噬菌蛭弧菌能夠明顯促進(jìn)中國(guó)對(duì)蝦生長(zhǎng)及非特異免疫因子活性的提高。將噬菌蛭弧菌以1%比例添加到中國(guó)對(duì)蝦基礎(chǔ)飼料中連續(xù)投喂25天后發(fā)現(xiàn)，對(duì)蝦增長(zhǎng)率、增重率、存活率分別提高了49.07%、74.61%、50%；溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力分別提高了約500%和100%，對(duì)蝦抗鰻弧菌感染的相對(duì)保護(hù)率也高達(dá)52.9%。這些研究結(jié)果均顯示了噬菌蛭弧菌在預(yù)防蝦蟹病菌感染方面的優(yōu)越性。


　　三、噬菌蛭弧菌在蝦蟹健康養(yǎng)殖應(yīng)用中的實(shí)際案例
　　
　　案例一：浙江蕭山南美白對(duì)蝦黃腿病

圖1 黃腿　

　　1、基本情況
　　
　　浙江杭州曹氏水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，在蕭山農(nóng)業(yè)對(duì)外綜合開(kāi)發(fā)區(qū)圍墾十七工段有土塘280畝（放苗6-7萬(wàn)尾/畝），且自有蝦苗淡化場(chǎng)。2012年8月，兩個(gè)蝦塘開(kāi)始偷死，原因不詳。后通過(guò)對(duì)養(yǎng)殖水樣的分析檢測(cè)、細(xì)菌的分離培養(yǎng)鑒定，得出結(jié)論：致病弧菌引起偷死（圖1）。
　　
　　2、治療方案及結(jié)果

圖2 治療成功，當(dāng)年9月份收蝦

　　

　　使用AB型養(yǎng)殖水體微生態(tài)殺菌劑（注：商品名，主要成分為噬菌蛭弧菌），2畝/包，5天/次。期間每次投完AB，間隔2-3天后使用AQ-I（注：商品名，主要成分為復(fù)合微生物活菌酶制劑）。使用AB后，直至9月收蝦，不再出現(xiàn)一只死蝦（圖2）。
　　
　　案例二：江蘇連云港梭子蟹育苗場(chǎng)熒光病
　　
　　1、基本情況
　　
　　2013年4月，江蘇省連云港市老板吳強(qiáng)發(fā)現(xiàn)其梭子蟹育苗場(chǎng)三個(gè)育苗池暴發(fā)大規(guī)模熒光病。由于對(duì)該病的病原不清楚，因而進(jìn)行了問(wèn)診。
　　
　　2、臨床癥狀及診斷分析

圖3 左側(cè)為未使用AB池水樣，弧菌數(shù)達(dá)5萬(wàn)個(gè)/ml；右側(cè)為AB使用24小時(shí)后育苗池水樣，弧菌數(shù)2萬(wàn)個(gè)/ml

　　

　　肉眼檢查：病蟹反應(yīng)遲鈍，蟹體全身均發(fā)熒光，在夜間病蟹活動(dòng)時(shí)，可見(jiàn)到象火龍般的一道道熒光。實(shí)驗(yàn)室檢查：從病蟹體內(nèi)通過(guò)弧菌選擇性培養(yǎng)基分離出形態(tài)均勻、大小一致的革蘭氏陰性弧桿狀細(xì)菌，而且水中弧菌的總濃度為5×105cfu/ml（圖3）。通過(guò)對(duì)分離菌進(jìn)行生理生化特性鑒定和16S rRNA基因測(cè)序比對(duì)，結(jié)果證實(shí)分離菌為弧菌，故確定該病為弧菌感染所致。
　
　　3、治療方案及結(jié)果

圖4 使用5天后，水體弧菌含量降至27個(gè)/ml

　　

　　根據(jù)以上癥狀與診斷分析，結(jié)合育苗池底部24h增氧的有利條件，給養(yǎng)殖戶(hù)制定了以下治療方案：馬上使用養(yǎng)殖水體生物殺菌劑AB，每立方米0.6克，每天1次，連用5天（圖4）。按照該方案使用后，病蟹明顯好轉(zhuǎn)，并逐漸痊愈�？紤]到育苗池水中自然弧菌含量較高，故在該病控制后，進(jìn)一步建議養(yǎng)殖戶(hù)繼續(xù)使用養(yǎng)殖水體生物殺菌劑AB，3-5天1次。該養(yǎng)殖戶(hù)按照該方案進(jìn)行育苗后蟹苗再也未發(fā)生包括熒光病在內(nèi)的細(xì)菌病。
　　
　　案例三：江蘇南通南美白對(duì)蝦甲殼潰瘍病
　　
　　1、基本情況

圖5 甲殼潰瘍病

　　
　　江蘇省南通市如東縣兵房鎮(zhèn)黃老板建有一個(gè)2畝的露天池塘、一個(gè)1畝的大棚和5個(gè)0.5畝的大棚，每畝投放蝦苗6-7萬(wàn)尾。2013年5月，該養(yǎng)殖戶(hù)發(fā)現(xiàn)部分蝦開(kāi)始出現(xiàn)黑斑，即甲殼潰瘍病（圖5），而且其周邊養(yǎng)殖戶(hù)的蝦也出現(xiàn)了普遍的黑斑病發(fā)病現(xiàn)象。
　
　　2、臨床癥狀及診斷分析
　　
　　肉眼檢查：病蝦反應(yīng)遲鈍，甲殼出現(xiàn)程度不一的黑褐色潰瘍，潰瘍中部凹陷，表現(xiàn)為數(shù)量不等的褐斑。解剖檢查：病蝦肝胰腺壞死，糜爛。實(shí)驗(yàn)室檢查：從病蝦肝胰腺組織中分離出形態(tài)均勻、大小一致的革蘭氏陰性弧桿狀細(xì)菌。通過(guò)對(duì)分離菌進(jìn)行生理生化特性鑒定和16S rRNA基因測(cè)序比對(duì)，結(jié)果證實(shí)分離菌為弧菌。
　　
　　3、治療方案及結(jié)果

圖6 病蝦逐漸痊愈

　　

　　使用養(yǎng)殖水體生物殺菌劑AB，每包（227克）2畝，2天1次。按照該方案使用后2天，對(duì)蝦不再死亡。之后繼續(xù)使用AB，10天1次，病蝦逐漸痊愈（圖6）。
　　
　　案例小結(jié)與討論
　　
　　飼養(yǎng)水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌病發(fā)生的原因，一是由于育苗池中弧菌大量繁衍，含量過(guò)高；二是水產(chǎn)動(dòng)物在惡劣水環(huán)境中自身免疫力和抵抗力下降，經(jīng)大量病菌侵襲而引發(fā)各類(lèi)疾病。

　

　　在水產(chǎn)動(dòng)物育苗及養(yǎng)殖過(guò)程中，要堅(jiān)持防重于治的原則，定期檢測(cè)水質(zhì)和弧菌總量，每天巡塘。尤其是養(yǎng)殖中后期，隨著水產(chǎn)動(dòng)物的不斷生長(zhǎng)，殘餌、糞便也逐漸增多，各種病菌，尤其是弧菌的含量增加。實(shí)踐表明，一旦發(fā)現(xiàn)水中弧菌含量超過(guò)1000個(gè)/ml時(shí)，都需盡快使用養(yǎng)殖水體生物殺菌劑AB進(jìn)行預(yù)防。否則，極有可能暴發(fā)各類(lèi)細(xì)菌感染，造成水產(chǎn)動(dòng)物大規(guī)模死亡（表1）。
　　
　　四、噬菌蛭弧菌必將成為提高蝦蟹健康養(yǎng)殖水平的新秀
　　
　　蝦蟹養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)成為我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的特色產(chǎn)業(yè)和亮點(diǎn)經(jīng)濟(jì)，對(duì)農(nóng)民的就業(yè)與社會(huì)穩(wěn)定的維護(hù)具有重要作用。如湛江市養(yǎng)蝦業(yè)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)鏈就解決了當(dāng)?shù)?0多萬(wàn)人的生活問(wèn)題。然而，蝦蟹養(yǎng)殖戶(hù)在養(yǎng)殖過(guò)程中解決水體污染、藥殘等一些瓶頸時(shí)，往往存在這樣或那樣的問(wèn)題。
　　
　　例如，目前在我國(guó)漁藥市場(chǎng)上，用于蝦蟹養(yǎng)殖的藥物五花八門(mén)，良莠不齊。不少蝦（蟹）農(nóng)缺乏藥物基本知識(shí)，不清楚哪些藥物殘留時(shí)間長(zhǎng)，哪些藥物是水產(chǎn)養(yǎng)殖禁藥，哪些藥物毒性強(qiáng)，往往無(wú)意識(shí)地造成了對(duì)蝦蟹產(chǎn)品的質(zhì)量安全隱患；導(dǎo)致蝦蟹發(fā)生中毒死亡。例如，對(duì)蝦氯霉素事件曾使我國(guó)對(duì)蝦產(chǎn)品屢遭限制和封殺；江蘇鹽城一養(yǎng)殖戶(hù)因誤用了硫酸銅和晶體敵百蟲(chóng)，使養(yǎng)殖的105畝水面的青蝦和河蟹發(fā)生了大量中毒死亡。
　　
　　因此，必須樹(shù)立蝦蟹無(wú)公害健康養(yǎng)殖理念，從蝦蟹苗到“餐桌”的全過(guò)程要嚴(yán)格樹(shù)立食品安全質(zhì)量關(guān)。雖然近年來(lái)一些EM原露、光合細(xì)菌等微生態(tài)制劑在促進(jìn)蝦蟹健康養(yǎng)殖過(guò)程中扮演了重要的角色，但這些微生態(tài)制劑僅能在水質(zhì)改良、增強(qiáng)免疫力等單一方面發(fā)揮功效，一旦蝦蟹暴發(fā)細(xì)菌性病害，往往無(wú)能無(wú)力，而噬菌蛭弧菌制劑則不同。它不僅同時(shí)具備了這些綠色環(huán)保產(chǎn)品水質(zhì)改良、增強(qiáng)免疫力的功效，而且還具有殺菌除菌、抗病治病的作用。而且，目前噬菌蛭弧菌及其劑型的開(kāi)發(fā)研究已經(jīng)受到了國(guó)家的非常重視�？上攵�知，噬菌蛭弧菌制劑作為具有我國(guó)特色的一種新型綠色環(huán)保漁藥，必將成為提高蝦蟹健康養(yǎng)殖水平的新秀。

漁歌子

十一、蛭弧菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用

蛭弧菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用（1）

蛭弧菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用(3)

蛭弧菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用(5)

蛭弧菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用(6)

vanadis

現(xiàn)在我對(duì)微生物越來(lái)越清醒，不是誰(shuí)就是誰(shuí)的天敵，有時(shí)候他們可以是朋友，不要趕盡殺絕

米來(lái)-小米

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漁歌子

米來(lái)-小米 發(fā)表于 2016-12-23 09:53
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sdlqw

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fjshenhq

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xyghjx

飼料顆粒機(jī)，飼料粉碎機(jī)，飼料攪拌機(jī),以及養(yǎng)殖整條生產(chǎn)線(xiàn)

hao263

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