在線交流 | 如何擴培沼澤紅假單胞菌、乳酸菌種、芽孢桿菌？

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6月18日晚交流的內(nèi)容
乳酸菌的建議擴培及應用


目前乳酸菌制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，潑灑在水體中的量遠遠大于拌料內(nèi)服的量。其在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中不會潑灑到環(huán)境當中，而是通常添加在飼料中，但是用量不大。

　　一、乳酸菌簡介
　　


　　通常我們所說的乳酸菌也叫乳酸桿菌。乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。凡是能在葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸的細菌統(tǒng)稱為乳酸菌。除極少數(shù)外，其中絕大部分都是動物體內(nèi)必不可少的且具有重要生理功能的菌群。人類腸道含有大量的乳酸菌群。養(yǎng)殖動物的腸道里面（尤其是恒溫動物）含有大量的乳酸菌群，水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的腸道中也有。
　　
　　常見的菌種主要包括嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、糞鏈球菌等，這些都屬于兼性厭氧、革蘭氏陽性菌。在有氧的條件下它們同樣也是能夠存活和繼續(xù)繁殖。
　　
　　我們在超市里面買的各種各樣的酸奶實際上都是很多種被衛(wèi)生部批準用于人食用的乳酸菌的發(fā)酵產(chǎn)物。咱們定期的在食物中補充一定的酸奶能夠促進消化，增加腸道內(nèi)的有益菌群數(shù)量，提高免疫能力。
　　
　　今天講的主題是干酪乳桿菌，以它為代表，把它放在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中是因為干酪乳桿菌的功能正好被水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)能夠利用到，而且我們認為它比其它幾種乳酸桿菌的效果更好一些。

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　　二、乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的作用


　　
　　乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的作用主要體現(xiàn)在以下幾條：
　　
　　1.肉眼可見的：誘食、肥水； 用于外環(huán)境的時候，早上用第二天肉眼就可以見到魚的食性增強。比如說在沒有用乳酸菌之前，吃食魚在早上的欲望比較低，吃食魚的面積相對來說小一些。用了乳酸菌之后，第二天早上同樣的時間段你再去投喂，會發(fā)現(xiàn)吃食魚的面積明顯比沒有使用乳酸菌前擴大了，而且是很明顯的擴大了，跟下午是一樣的。這就說明，它有一個肉眼可見的誘食作用。其實這個誘食的作用就是改良了水質(zhì)。 還有一個，你會發(fā)現(xiàn)用了之后水通常會變肥。變肥指的是水體當中的微生物、浮游植物、原生動物、浮游動物等在水體當中數(shù)量變多了，也就是增殖了，多了之后我們?nèi)庋劭吹降木褪撬�變肥了，就是這么一個現(xiàn)象。
　　
　　2.間接的增氧、改良水質(zhì)；
　　
　　乳酸菌由于它把水體變肥了，會對水體產(chǎn)生間接的增氧作用。雖然它本身不產(chǎn)氧，但是它培養(yǎng)了大量的浮游植物，因此間接的增氧作用是很明顯的。
　　
　　3.噴灑在飼料上投喂，增加養(yǎng)殖動物腸道內(nèi)有益菌，顯著提高飼料利用率；提高免疫力，降低腸道疾病發(fā)生率。
　　
　　在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，我們也會把乳酸菌制劑按照一定的比例噴灑到飼料中投喂，增加養(yǎng)殖動物腸道內(nèi)的有益菌（當然這個要求就是你拿到的乳酸菌制劑是真的是活菌，而不是純的代謝產(chǎn)物，這個問題我想后面要專門說一下）。
　　
　　噴灑到飼料上可以顯著的提高飼料的利用率、降低飼料系數(shù)，提高養(yǎng)殖對象的免疫力，降低腸道疾病發(fā)生率。
　　
　　這里有些科研的報告，我想給大家說一下。我們用乳酸菌投喂之后和之前草魚腸道內(nèi)的腸壁皺褶發(fā)生明顯的改變。飼料添加乳酸菌其結(jié)果是中腸、后腸的腸壁皺褶都明顯的變多了、變長了、變密了，意味著腸道內(nèi)壁的表面積擴大了。食物和腸道內(nèi)壁的接觸的表面積擴大之后，它吸收食物當中的有效成分的速度就更快了，消化功能也提高了，食物的分解更徹底了，營養(yǎng)吸收得更多了，結(jié)果有效地降低了飼料系數(shù)，提高了腸道內(nèi)的有益菌的數(shù)量。
　　

　　根據(jù)2008年農(nóng)業(yè)部批準的使用的飼料添加劑中的安全微生物，農(nóng)業(yè)部的公告1126號文件，實際上有十多種都是乳酸菌。

　　干酪乳桿菌
　　
　　今天講的干酪乳桿菌我們稱之為水產(chǎn)專用，因為在相應的對比實驗中干酪乳桿菌應用到水環(huán)境中的效果比其它的乳桿菌表現(xiàn)得更突出一些，雖然這個差別不是特別的明顯，但是我們還是認為以這種菌為主的話可能得到的結(jié)果會比其他的嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌為主的效果好。

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三、菌種來源
　　


　　菌種經(jīng)過農(nóng)業(yè)微生物學國家重點實驗室保種和選育，然后經(jīng)過華中農(nóng)業(yè)大學生命科學技術(shù)學院一級擴培，再到我們公司的二級擴培，最后做成成品來銷售。
　　
　　之前，乳酸菌主要還是用在城市生活污水處理當中，在這個過程當中我們發(fā)現(xiàn)把乳酸菌運用到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上也可以起到很好的效果，因此乳酸菌在08年的時候我們才開始逐步的往水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上推廣干酪乳桿菌，實際上我們現(xiàn)在生產(chǎn)的是以干酪乳桿菌為主的復合乳桿菌。
　　
　　我就不再重復地去介紹我們的華中農(nóng)業(yè)大學生命技術(shù)學院了。因為在之前已經(jīng)講過了。

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　　四、乳酸菌的擴培


　　
　　乳酸菌簡易擴培需要的設(shè)備（我們現(xiàn)在講的都是簡易擴培，指的是大型的養(yǎng)殖戶或者小養(yǎng)殖戶都可以做到）
　　
　　1、容積1噸或者0.5噸的不透明的塑料罐，白色為宜。如果你是小養(yǎng)殖戶，可以采取有蓋的白桶，密封的都是可以。
　　
　　2、恒溫電加熱控制裝置，因為乳酸菌在恒溫動物中大量的存在。比如說我們?nèi)祟惖捏w溫正常體溫36.5℃左右，差別不會太大。豬馬牛羊鴨等也基本上是37-40℃這個樣子，體內(nèi)的溫度相對來說是非常穩(wěn)定的。在培養(yǎng)乳酸菌制劑的過程中也要求培養(yǎng)的溫度基本保持在38℃。
　　
　　3、自來水——無菌水制備設(shè)備，和家里送來的純凈水實際上就是用這個設(shè)備做出來，原理是一樣的，有大有小，大家可以看到后面的課件上的不銹鋼的設(shè)備。
　　
　　4、功率不超過100瓦的潛水泵。潛水泵起的作用是不斷的在罐體內(nèi)攪拌，把容易沉到底部的比較的培養(yǎng)基均勻分布在罐體內(nèi)（被我們的菌種利用掉）。
　　
　　這些設(shè)備溫控裝置很簡單，你也可以做得更精致一些，像圖像上這種溫控裝置的成本大概不到200塊錢。如果你要做得更精致一點的話，可能要加一個配電箱（相應的東西全部裝在配電箱里面），再配上一個溫度探頭再配上一個U型的加熱管，加起來的成本可能就超過300塊了。
　　

　　大家看干酪乳桿菌簡易擴培設(shè)備這張圖，圖中罐體中只有1/3的發(fā)酵，這是一個濃縮發(fā)酵。也就是一組培養(yǎng)基+一組菌種，然后只加了330kg無菌水，最后再發(fā)酵的過程。也就是有些企業(yè)做1L的產(chǎn)品，1L EM菌或者乳酸菌用于3畝的水體的這樣一個濃度的濃縮液。也可以把罐子里面的無菌水（990kg）全部加滿，做成一般的市場上5升的瓶子裝用于5畝水體的濃度的稀釋液。濃縮和稀釋的實際上最后的比例是一樣的，用量的比例是一模一樣的。
　　




　　另外一個罐子無論是方的還是圓的都不影響產(chǎn)品的質(zhì)量。
　　
　　自動溫控攪拌裝置
　　


　　大家可以看到一個很簡單的塑料的潛水泵和一個熱得快。熱得快是針對小型養(yǎng)殖戶的，他用這種就可以了。但這熱得快只有1.5千瓦，它比較容易燒壞。建議如果用1噸的大罐子去做簡易擴培的話就用3千瓦的工業(yè)用的加熱管，加熱管相對來說，速度更快，而且不容易壞，這張溫控設(shè)備上有一個電子溫控器和空氣開關(guān)這都是為探頭服務的。
　　


　　不銹鋼過濾罐
　　




　　無菌水從不銹鋼過濾罐的上方進入，從下方出來（圖片沒有把下方照出來）然后通過紫外燈的滅菌裝置一頭進一頭出，那么基本上可以把水當中的雜質(zhì)以及浮游植物和所有的微生物都能夠殺死掉了，接近于純凈水的標準（我們說的無菌水就是這個意思）。通過這兩個設(shè)備得到的就是無菌水，這個無菌水我們就把它加入罐體當中。

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　　五、干酪乳桿菌菌種定向培養(yǎng)基
　　


　　照片當中只照到了5個5L的瓶子，其中2個比較淺的灌得比較滿的咖啡色瓶子是兩瓶菌種，剩下的3瓶就是培養(yǎng)基。實際上標準化的是4瓶培養(yǎng)基，圖片上只照了3瓶。
　　
　　1、培養(yǎng)基的原料配方
　　


　　濃縮乳酸菌原料配比：10L菌種+ 330kg的無菌水；
　　
　　成品乳酸菌原料配比：10L菌種+990kg的無菌水
　　
　　2、培養(yǎng)方法
　　


　　①        首先將乳酸菌的濃縮培養(yǎng)基加適量的水煮沸5分鐘以上（大家記住一定要煮沸5分鐘以上），殺滅其中所有的微生物。如果不到5分鐘，沒有煮沸，那么做出來的雜菌可能就比較多。
　　
　　②        補充無菌水到330kg，或者做直接的產(chǎn)品，那你就直接補到990kg。
　　
　�、�        加入菌種開始培養(yǎng)，培養(yǎng)的過程把培養(yǎng)液的溫度保持在35-40℃，建議直接在溫度控制開關(guān)上把它調(diào)整到38℃，這是最合適的。
　　
　　在38℃恒溫條件下培養(yǎng)36-48個小時，基本上可以完成培養(yǎng)。如果你要做稀釋的，那在這個時候再加入660公斤無菌水就可成為乳酸菌的成品，灌裝或者直接使用。
　　
　　乳酸菌的稀釋成品和濃縮成品到底有什么區(qū)別？無非就是濃縮的1L用3畝水體而稀釋的1L只能用1畝水體，所以大家在市面上買的相應的乳酸菌類的產(chǎn)品，5升裝的如果用5畝說明他用的是我們說的990公斤水加上培養(yǎng)基和菌種做出來的。如果1L的產(chǎn)品可以用3畝水體那就是濃縮的方法做出來的（還能不能更濃縮了呢？不能了）。
　　
　　乳酸菌的濃度問題，因為乳酸桿菌是有體積的，雖然它很小。目前這種大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)，簡易擴培的方式，能夠做到的最高濃度基本上也就是我剛才講的330kg無菌水+一組定向培養(yǎng)培養(yǎng)基+菌種，然后灌裝出來的成品。如果你同樣灌裝5L的油壺，你就可以用到15畝水體。

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　　六、注意事項
　　


　　1、在擴培乳酸菌過程中，先加入無菌水，其次加入煮沸5分鐘以上的定向培養(yǎng)基。加水需要很長的時間，所以我們一邊加水一邊煮培養(yǎng)基。培養(yǎng)基煮沸5分鐘以上后，再把它倒入到罐體中，水可能還沒加滿，這時候你一定要注意在加水的過程中盡可能的將培養(yǎng)容器的蓋子蓋在口子上面，減少空氣當中的細菌落入到罐體中的機會。另外等所有的東西都加好后一定要蓋蓋子。
　　
　　蓋完蓋子之后還建議大家用膠帶密封，以免空氣中的微生物掉到罐體當中造成污染，蚊蟲都有可能在簡易擴培時飛到罐體中去（這個是經(jīng)常發(fā)生的）。
　　
　　2、培養(yǎng)容器使用過后要及時清洗，使用前還要用消毒劑進行消毒處理（消毒劑通常是二氧化氯），將二氧化氯直接噴霧到罐體的體壁上下，進行全部的噴霧，進行消毒處理，消毒之后要繼續(xù)生產(chǎn)乳酸菌的話，再用無菌水把整個罐體沖洗一遍，把消毒液沖走，變成一個無菌的狀態(tài)就可以了。
　　
　　3、注意接種時培養(yǎng)液的溫度不能高于45℃，防止菌種被殺死。因為乳酸菌溫度過高的時候會被高溫殺死，所以在生產(chǎn)過程中，大家要記住這個步驟：首先把罐體消毒完之后用無菌水沖洗一次，然后把水放掉，再開始加無菌水，加無菌水的同時把培養(yǎng)基煮沸5分鐘，煮沸之后馬上倒進去，這個時候水可能還在加，等到水加到快滿的時候再把菌種加進去，菌種加了之后立刻將攪拌裝置、溫度探頭、工業(yè)用的加熱管消毒過后全部放到罐體當中。
　　
　　4、        成品應為正常發(fā)酵酸香味，有異臭味則污染雜菌。
　　


　　5、溫控裝置可以采用熱帶魚養(yǎng)殖的電加熱溫控方式。小規(guī)模的生產(chǎn)可以在桶里面做，用電加熱的裝置。如果溫度加不到38℃，只能加到35℃也是行，但是培養(yǎng)的時間就延長。
　　
　　6、無菌水的制備過程就是要用自來水經(jīng)一級過濾和紫外殺菌器處理獲得。沒有自來水的地方或者在偏遠的湖泊（不是水庫），用池塘里面的水或者井水也是可以，但是必須要把它曝氣或者燒開，盡可能的消毒。
　　
　　7、最好使用新鮮的菌種（我公司提供的乳酸菌菌種保質(zhì)期30天），放置時間越長活力就越低，菌數(shù)相對來說會下降。
　　
　　成品菌液的濃度基本上可以達到100億個/ml。
　　
　　成功的制備完畢之后，pH基本上都在3.8左右。能不能做到更低呢？可以。pH可以達到 3.6甚至更低，當pH值低于3.8的時候罐體內(nèi)的乳酸菌等有益菌數(shù)量會隨之下降，它雖然是產(chǎn)乳酸的，但是乳酸菌本身對酸的忍受能力是有限的，當pH過低或者低于3.0的時候，大量的菌都被它自己產(chǎn)生的酸殺死了。
　　
　　我們在生產(chǎn)過程發(fā)現(xiàn)有些養(yǎng)殖戶做得乳酸菌的pH低于3.8甚至更低低于3.0，但把這個產(chǎn)品潑到水里面后仍然是有效的。大家就會問照你這么說活菌都被殺死了一部分，沒有 pH值3.8的時候那么高了，為什么你潑進去還是有效呢？實際上乳酸菌比較特殊，乳酸菌本身相對沼澤紅假單胞菌和芽孢桿菌活菌來說能夠存活下來是比較難的，因為條件不適應。
　　
　　那么問題又來了，我們投下去這些東西到底是什么在起作用呢？是乳酸菌的活菌在起作用還是乳酸菌的代謝產(chǎn)物在起作用呢？實際上乳酸菌的活菌是能夠起作用的，在水體當中在它能夠存活的不長的時間里，它也起到了很好的作用。它的代謝產(chǎn)物能夠促進水體當中的土著微生物包括浮游植物的生長和繁殖。說白了，乳酸菌制劑的代謝產(chǎn)物是其他土著微生物和植物的營養(yǎng)源（我們可以這樣理解），當然不是說，它是唯一的營養(yǎng)源而是錦上添花一般的營養(yǎng)源。

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　　七、消毒步驟

　　罐體內(nèi)部消毒的步驟其實很簡單（這里講的是簡易擴培的方式，真正的做菌種不能這么做，真正的生產(chǎn)企業(yè)也不能這么做。如果你只銷售到周邊很近的地方，你可以用簡易擴培的方式去做，有點雜菌沒關(guān)系。如果你銷售到很遠的地方，你還用這個辦法做，它就有可能出現(xiàn)，脹氣爆瓶這么一個有趣的現(xiàn)象）。
　　
　　1、罐體內(nèi)部的消毒
　　


　　①用高壓水槍沖洗附著物（自來水）；
　　
　　②放掉臟水，再次加入自來水（需要覆蓋出水口上方），加入適量二氧化氯（產(chǎn)生二氧化氯氣體），浸泡、熏蒸10-30分鐘，加上蓋子；
　　
　�、鄯诺粝�毒水，關(guān)掉出水閥門，用無菌水由上至下沖洗罐體，使蓄水量覆蓋出水口上方后全部放掉，完成整個消毒過程。說白了就是想盡一切辦法把罐頭變成基本無菌的狀態(tài)。
　　
　　2、環(huán)境消毒和器具消毒
　　


　�、倏諝庀�毒的方法：在生產(chǎn)的車間內(nèi)，安裝紫外燈，在加入菌種前開燈照射30分鐘（有人的時候盡量不要開紫外燈，因為30分鐘太長，對于人來講會曬傷到皮膚）�；蚴褂酶邼舛榷�氧化氯溶液自然熏蒸（這也是很好的一個辦法）。將高濃度的二氧化氯溶液放置到雞舍和豬舍合適的地方，讓它自然熏蒸，能有效地殺滅空氣中的致病微生物和分解掉一部分臭味。
　　
　�、谄骶呦�毒：指的放入罐體內(nèi)的溫度探頭、潛水泵、加熱管都需要在二氧化氯的消毒液中浸泡2分鐘，再用無菌水沖洗（要沖洗干凈）后放入罐體。不要把消毒液帶入到罐體當中，否則它會殺死掉一部分菌種。

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　　八、干酪乳桿菌簡易擴培案例
　　


　　我們再看一下這兩張圖，這2張照片就是干酪乳桿菌簡易擴培案例，左邊一張圖的顏色相對來說比較黃，表面上有一點點氣泡，但是沒有什么其他的雜質(zhì)；右邊的那張圖表面有明顯的一些個體比較大的破不了的氣泡，而且表面上有像粉末狀的東西，明顯的有雜菌。這個東西是什么呢？這些東西實際上是芽孢，灌裝之后，容易脹氣，并不是因為芽孢在產(chǎn)氣而是因為其他的雜菌在產(chǎn)氣。
　　
　　所謂的雜菌是什么意思？我們現(xiàn)在指的是做菌種，做的菌種是純的干酪乳桿菌，提供的純的干酪乳桿菌菌種。說明書上很明確的寫的有90%以上含量是干酪乳桿菌，剩下的不足10%都是屬于乳酸菌這一類的，比如講有植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌等，但在菌種這個概念上來講，那些都叫做雜菌了，因為我們說的菌種是純的，就是某一種叫菌種。

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　　九、灌裝后脹氣的常見主要原因：
　　


　　灌裝后脹氣的常見主要原因：
　　
　　1、        純的干酪乳桿菌是不產(chǎn)氣的，但我們公司現(xiàn)在生產(chǎn)的叫做復合乳桿菌的成品是產(chǎn)氣的，因為我們加了很多的其它的乳酸桿菌，我們發(fā)現(xiàn)用復合型的乳酸菌用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)效果更好一些。
　　
　　2、        脹氣的原因有可能是發(fā)酵時間過短，培養(yǎng)基還沒有消化完，糖類物質(zhì)還沒有消耗完前提下?lián)u動或者運輸過程當中不斷的振動就可能會產(chǎn)生氣體。
　　
　　當然，如果在菌種里面本身就有產(chǎn)氣的菌種它當然會產(chǎn)氣當然會脹氣。現(xiàn)在還有些公司生產(chǎn)的自放氣的那種負壓的蓋子，就是里面有壓力了產(chǎn)氣了，就自動的把蓋子頂開，把氣放出去，放到和外面的氣壓平衡的時候，蓋子又關(guān)閉起來了。不過我倒是覺得沒有必要，因為蓋子的成本比較高，采購一個蓋子要增加成本，最終還要算到咱們老百姓的頭上。

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　　十、養(yǎng)殖戶使用自來水或者井水作為水源是否可行？
　　


　　養(yǎng)殖戶在簡易擴培的時候在沒有條件使用無菌水的情況下，使用自來水或者井水作為水源也是可以的，但是會產(chǎn)生部分雜菌。如果現(xiàn)做現(xiàn)用有雜菌也沒關(guān)系，只是灌裝之后是會脹氣，如果養(yǎng)殖戶馬上使用不會有明顯的負面影響。
　　
　　但是活菌制劑的生成企業(yè)一定要用無菌水作為水源，而且一定要用不銹鋼的發(fā)酵罐，還有電加熱系統(tǒng)等相對來說高端一點的配置來生產(chǎn)。
　　
　　這種簡易擴培面向的用戶主要是大水面、大規(guī)模合作社和一些小型的加工企業(yè)（它生產(chǎn)的產(chǎn)品只供應在周邊的市場，那是可以的，長途運輸就有麻煩了）。
　　
　　不得不說有一些漁民，他的面積不夠大，水體不夠大，他買回去1噸成品，但他一次只能用半噸，他就先用半噸，然后剩下來的再過3-5天再用。這樣行不行呢？當然是可以的，但是一定要注意要，要把它密封，不能感染雜菌，盡可能的讓它和空氣隔絕，但是這個是很難做到的。

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　　十一、發(fā)酵好的乳酸菌能不能長期存放？


　　
　　當存放時間過久產(chǎn)生易臭的時候那就已經(jīng)可以判定是雜菌污染了，或者在生產(chǎn)過程中你做出來的都不是那種酸香味而是臭味，那肯定是感染了雜菌。在這種情況下依舊是有效果的，雖然有雜菌有臭味，但它用下去還是有效的。
　　
　　說一下存放時間。目前市場上流行的所有的活菌制劑，我們標出的時間大多數(shù)比如講液態(tài)的大多數(shù)是12個月，但是說句實話，很多的液態(tài)制劑如果里面真有活菌的話，6個月之內(nèi)可能菌數(shù)下降的相對緩慢一些，但是6個月以后下降得非常明顯、非常的快。

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　　十二、成品菌液的顏色問題


　　
　　一般做出來的菌液的顏色，乳酸菌稀釋的產(chǎn)品，它的顏色相對來說是比較淡的，是黃棕色。如果做濃縮的，它的顏色相對來說濃度要高一些，可能是黃褐色，然后還有一些是棕黑色的。
　　
　　這些原因是什么呢？
　　
　　1、        顏色不同，是因為不同批次的培養(yǎng)基的顏色差異對菌液成品的顏色有較大的影響。我們的培養(yǎng)基的顏色通常來講是近黑色，近黑色也是有區(qū)別的，因為我們的培養(yǎng)基也不是完全的一模一樣，每一批次培養(yǎng)基可能有一點稍微的顏色差別，但是在營養(yǎng)成分上差別幾乎沒有，因此培養(yǎng)出來的產(chǎn)品有時候偏淡一些，有時間偏深一些，這都沒有關(guān)系。
　　
　　2、        顏色的變化還有一個原因就是大量的使用糖蜜做的培養(yǎng)基也會使菌液呈近黑色（這個已經(jīng)很多企業(yè)已經(jīng)在用了）。糖蜜是糖源，用大量糖蜜，別的什么都不使用，培養(yǎng)出來成品菌液顏色相對來說深一些，但是如果做的成品的顏色就是黑色的那也不科學。我可以負責任地告訴大家，雖然糖蜜的顏色很深，但是經(jīng)過乳酸菌的代謝之后，它的顏色會變淺，整個菌液的顏色相對來說都會變淺，如果拿到手的，菌液的顏色是黑的或者特別黑，那我就要懷疑它是不是添加了焦糖色素了或者發(fā)酵過程不完全。

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　　十三、擴培菌種為什么要用定向培養(yǎng)基
　　


　　乳酸菌的擴培，第一要使用定向的培養(yǎng)基；第二要經(jīng)常去購買原種而不是自己留種，自己留下來的種可能會變異了，一次變一點一次變一點，從量變到質(zhì)變到最后真的不是以前的那個功能了，所以你培養(yǎng)出來的東西也許還是保持了原來的酸香味，也許顏色也類似，但是用到水體當中結(jié)果將會發(fā)生相對明顯的變化。
　　
　　我這里還要說明一個觀點，如果說大家用糖蜜或者單純的糖做培養(yǎng)基的話你得到的這個菌數(shù)相對來說會低一些。
　　
　　關(guān)于菌種的變異了，我這個課件里面也舉了兩個例子。隨著環(huán)境的改變、時間的推移，細菌和病毒在不斷的變異。營養(yǎng)鹽、溫度、pH值理化因子都可以成為環(huán)境。
　　
　　你比如說禽流感病毒， 2005年的時候是H5N1到了2013年變成了H7N9型，到現(xiàn)在又變異了，但它都是禽流感病毒。
　　
　　再比如造成魚類細菌性敗血癥的的元兇嗜水氣單胞菌，在國內(nèi)的不同地區(qū)，獲得的不同的菌株型就不一樣。比如說在湖北找到的嗜水氣單胞菌，用它做疫苗發(fā)到廣東去打；在廣東珠三角地區(qū)分離到的嗜水氣單胞菌，用它做細菌性的疫苗拿到了湖北去打，打到草魚身上，可能起不到作用。當然我說的是可能，不是一定。因為細菌的菌株型不同，它的毒力也不一樣，它的生存能力也不同，包括魚種也不一樣，可能效果就出現(xiàn)了差別。因此致病微生物發(fā)生不同情況的變異在不同的地區(qū)有不一樣的菌株形式很正常。
　　
　　所以在菌種的擴培當中，一味的為了降低成本而留種，留一次，留兩次，留三次甚至更多次，其結(jié)果并不是我們想象的那么好。

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　　十四、如何做到科學的在水環(huán)境中使用乳酸菌制劑
　　


　　乳酸菌制劑說了半天到底是什么，其實大家應該明白了。目前根據(jù)農(nóng)業(yè)部微生物產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢疫檢測中心在市場上送樣檢測到的結(jié)果，很多所謂的EM菌實際上就是乳酸菌這一類的擴培的得到的產(chǎn)物。有很多不脹氣的產(chǎn)品檢測的結(jié)果是一個活菌都沒有。至于為什么，原因很簡單，可能它是產(chǎn)氣菌，為了不脹氣我們把他殺死掉了，這個有可能。另外還有一些不脹氣的新鮮的產(chǎn)品還是有一點活菌，但是具體檢測結(jié)果我不可能告訴大家，我也負不了這個責任。
　　
　　但是我們可以負責任的講，目前EM菌這類產(chǎn)品主要起作用還真的就是乳酸菌這一類的物質(zhì)在起作用。那么，真正的潑灑到水體當中后到底是活菌在起作用還是它的代謝產(chǎn)物在起作用，一句話最終是它的代謝產(chǎn)物在起作用。實際上我們潑灑到水體中的真正的這些微生物制劑，它們都是藥引子，我們潑灑的量是很少的，水體是很大的，他們起到的就是一個藥引子的作用。
　　
　　當我們把這些有活菌或者沒有活菌的微生物制劑倒到水里面之后它第一會激發(fā)土著微生物功能上的不斷擴張，原本它沒有那么多的營養(yǎng)源，現(xiàn)在受到外來的營養(yǎng)源的影響，它會越來越多了，它的功能也就激發(fā)出來了，它就更好的起作用了。我們知道微生物是基礎(chǔ)的生產(chǎn)者和代謝者，土著微生物的代謝產(chǎn)物又讓水體中相對高級一些單細胞浮游植物、多細胞浮游植物、原生動物（包括我們一些小型的輪蟲）都可以利用它的代謝產(chǎn)物，這樣一來咱們的這個生物圈當中數(shù)量就會增加。
　　
　　科學的使用時間，大家記住是在早上的天亮之后盡早使用，而不是等到九點十點或者更晚。原因很簡單，它潑到水體里面實際上激發(fā)了水體原本存在的各種微生物和浮游植物的生長。你想想看，它起到了這么一個作用，那你是不是應該更早，在有光已經(jīng)開始天亮的時候就把它投入進去呢？當然有一個前提條件，在缺氧浮頭的時候不要用。