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flyjet 2016-7-12 23:40
水產(chǎn)養(yǎng)殖中弧菌的分離檢測(cè) (TCBS 培養(yǎng)基與弧菌顯色培養(yǎng)基） TCBS 培養(yǎng)基分離弧菌 國(guó)標(biāo) GB4789.7-2013 食品微生物學(xué)檢測(cè) 副溶血性弧菌檢測(cè) 中 硫代硫酸鹽 - 檸檬酸鹽 - 膽鹽 - 蔗糖（ TCBS ）瓊脂配方： 酵母膏粉 5g ，蛋白胨 10g ，氯化鈉 10g ，檸檬酸鈉 10g ，硫代硫酸鈉 10g ，膽酸鈉 3g ， 牛膽粉 5g ，蔗糖 20g ，檸檬酸鐵 1g ，瓊脂 15g ，溴麝香草酚蘭 0.04g ，麝香草酚蘭 0.04g 最終 pH 8.6 ± 0.2 TCBS 瓊脂的原理就是發(fā)現(xiàn)蔗糖發(fā)酵產(chǎn)生酸的菌落，霍亂陽(yáng)性，副溶血性弧菌陰性， 副溶血性弧菌 不發(fā)酵蔗糖，菌落呈藍(lán)綠色。 霍亂弧菌 發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸，菌落呈黃色。然后，這些有機(jī)酸，也被這種細(xì)菌利用，分解成二氧化碳揮發(fā)了，有機(jī)酸沒(méi)有了，菌落就重新變成綠色的了。 該培養(yǎng)基中的牛膽粉有抑制其他革蘭氏陽(yáng)性菌的作用，與枸櫞酸鈉和硫代硫酸鈉合用時(shí)，對(duì)大腸桿菌有明顯抑制作用。同時(shí)枸櫞酸鈉和枸櫞酸鐵可使霍亂弧菌免受其他抑菌劑的作用，加之有營(yíng)養(yǎng)豐富的酵母浸粉，霍亂弧菌又能利用蔗糖分解產(chǎn)酸，所以菌落較大，且呈黃色。大腸桿菌等雜菌菌落較小或不生長(zhǎng)，故易識(shí)別。 黃色菌落只要是利用培養(yǎng)基中的蔗糖產(chǎn)酸，菌落就是黃色的，像溶澡弧菌、河流弧菌、麥?zhǔn)匣【�、等要本培養(yǎng)基上均為黃色菌落，并不是黃色菌落就是霍亂弧菌。樣品中常常存在大量可以發(fā)酵蔗糖的干擾細(xì)菌，常常會(huì)碰到整個(gè)平板會(huì)變黃色的現(xiàn)象。 另：霍亂弧菌一旦檢出要立即送有關(guān)部門(mén)，普通實(shí)驗(yàn)室是不準(zhǔn)保存的�。� 黑色：細(xì)菌分解含硫物質(zhì)產(chǎn)生硫化氫同時(shí)與培養(yǎng)基中的含鐵物質(zhì)反應(yīng) , 從而產(chǎn)生黑色的菌落 . 以上內(nèi)容來(lái)源于食品伙伴網(wǎng) 選用 TCBS 作為分離培養(yǎng)各種弧菌的培養(yǎng)基，其特異性不是很強(qiáng)；不少細(xì)菌在 TCBS 上也能生長(zhǎng)，當(dāng)生長(zhǎng)較慢，需培養(yǎng) 24h 后方可長(zhǎng)成 0.5~1mm 的黃，綠色菌落。為有效排除干擾，及時(shí)準(zhǔn)確地判別出是否存在弧菌屬細(xì)菌，可結(jié)合弧菌屬細(xì)菌在 TCBS 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的特點(diǎn)：弧菌生長(zhǎng)快，菌落大，培養(yǎng) 4~5h 原劃線處有菌苔生長(zhǎng)， 8~10h 可長(zhǎng)出小菌落， 16h 菌落可達(dá) 2mm; 其他細(xì)菌在 TCBS 上無(wú)此特點(diǎn)。因此，在篩選弧菌屬細(xì)菌的選擇性培養(yǎng)基時(shí)要特別注意在確定的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行菌落的觀察，時(shí)間超過(guò)即影響其準(zhǔn)確性。 以上表 2 及文字節(jié)選自浙江工商大學(xué)趙廣英等人論文《水產(chǎn)品中多種致病性弧菌的分離鑒定》。 弧菌顯色培養(yǎng)基 原理： 目標(biāo)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，代謝產(chǎn)生特異性的酶與酶底物作用，底物經(jīng)酶水解作用釋放顯色基團(tuán)使菌落顯色。霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落呈（淡）藍(lán)綠色， 副溶血性弧菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落呈紫紅色。 使用方法 ： 按說(shuō)明書(shū)使用量（不同廠家重量略有不同）稱取培養(yǎng)基于 1L 蒸餾水或去離子水（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際需要配比加水）；充分混勻，加熱并不斷攪拌至完全溶解，煮沸約 2min; 滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至 50 攝氏度時(shí)，鋪平板，待培養(yǎng)基完全凝固后使用。使用前儲(chǔ)存于暗處。劃線接種后于 37 ℃ 培養(yǎng) 24 小時(shí)。 保存 ：干粉培養(yǎng)基于 30 ℃以下陰涼干燥處存放，制備好的平板于 2-8 ℃避光，可保存一周。 說(shuō)明： 1 、同類(lèi)產(chǎn)品存在不同配方，或采用不同的顯色劑，因此菌落形成的顏色不同。 2 、副溶血性弧菌在該顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)紫紅色菌落； 注意：本培養(yǎng)基中含有的成分對(duì)人體有毒害作用，使用時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施，避免與眼睛、皮膚接觸，避免吸入或吞食。 目前有進(jìn)口科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基（干粉），國(guó)產(chǎn)陸橋弧菌顯色培養(yǎng)基（干粉），陸橋有新推出弧菌顯色培養(yǎng)基平板等產(chǎn)品。 按照國(guó)標(biāo)方法配置的 TCBS 培養(yǎng)基價(jià)格比價(jià)便宜�；【@色培養(yǎng)基價(jià)格相對(duì) TCBS 比較貴。一塊弧菌顯色培養(yǎng)基成本大約要十幾塊，對(duì)于蝦農(nóng)來(lái)說(shuō)是一筆不小的開(kāi)支。不過(guò)弧菌顯色培養(yǎng)基對(duì)于副溶血弧菌等目標(biāo)菌的分離效果要好于 TCBS 培養(yǎng)基，開(kāi)發(fā)殺弧菌藥品，噬弧菌等的公司可以用來(lái)驗(yàn)證藥品殺弧菌，特別是殺副溶血性弧菌的驗(yàn)證。市面上水產(chǎn)用的 TCBS 培養(yǎng)基如果按照國(guó)標(biāo) GB4789.7 TCBS 配方生產(chǎn)的產(chǎn)品，也就是常用的黃弧菌，綠弧菌培養(yǎng)基，可能實(shí)際上對(duì)弧菌的分離效果并不明顯，國(guó)標(biāo) 4789.7 是食品行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)，在檢出目標(biāo)菌后一般還有進(jìn)一步生化鑒定，以確定是哪類(lèi)弧菌。但蝦農(nóng)并不具備進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的技術(shù)和能力，只能根據(jù)肉眼判斷黃弧菌或者綠弧菌，而無(wú)法得知是否是導(dǎo)致蝦病的致病弧菌�；【@色培養(yǎng)基可以區(qū)分副溶血弧菌及其他幾種致病菌，對(duì)于殺弧菌產(chǎn)品的藥品公司有一定針對(duì)性，至少可以驗(yàn)證殺弧菌前后幾類(lèi)致病弧菌的數(shù)量驗(yàn)證殺弧菌效果。
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分享 光合細(xì)菌
小清哥 2015-12-30 09:44
從微生物學(xué)的角度上講，光合細(xì)菌（簡(jiǎn)稱PSB）是一大類(lèi)能進(jìn)行光合作用的原核生物的總稱，分為產(chǎn)氧光合細(xì)菌和不產(chǎn)氧光合細(xì)菌兩大類(lèi)。產(chǎn)氧光合細(xì)菌主要是藍(lán)細(xì)菌，或稱之為藍(lán)藻和原綠藻，在分類(lèi)上屬于藻類(lèi)。 　　 　　這里所說(shuō)的光合細(xì)菌是能在厭氧光照條件下進(jìn)行不產(chǎn)氧的光合作用的原核生物。分為4個(gè)科：紅螺菌科、著色菌科、綠菌科和綠曲菌科。主要特征：含有光合色素——菌綠素；在厭氧、光照條件下進(jìn)行光合生長(zhǎng)，且不產(chǎn)氧。 　　 　　市場(chǎng)上見(jiàn)到的光合細(xì)菌劑型大致有液體制劑、濃縮液、固體制劑、凍干粉等。相對(duì)而言，液體制劑較容易大量培養(yǎng)和批量生產(chǎn)，且培養(yǎng)物的活性較強(qiáng)，光合細(xì)菌的代謝物含量豐富。應(yīng)用效果也較好，目前在各劑型中是使用量最大的一種。 　　 　　在 水產(chǎn) 養(yǎng)殖 中運(yùn)用的光合細(xì)菌主要是光能異養(yǎng)型、紅螺菌科中的一些品種，我們主要介紹沼澤紅假單胞菌。根據(jù)農(nóng)業(yè)部1126號(hào)公告（2008），準(zhǔn)許沼澤紅假單胞菌以 飼料 添加劑的方式使用于養(yǎng)殖動(dòng)物。 　　 　　沼澤紅假單胞菌生長(zhǎng)的適宜水溫15—40℃,最適水溫為30—36℃。是兼性厭氧菌，是革蘭氏陰性菌，以小分子有機(jī)物、二氧化碳等作碳源，以氨、銨鹽、硝酸鹽或亞硝酸鹽作氮源。菌體蛋白質(zhì)含量高，并含有大量促進(jìn)魚(yú)蝦生長(zhǎng)的活性因子，如生物素、維生素、β-類(lèi)胡蘿卜素等，可明顯促進(jìn)養(yǎng)殖生物的生長(zhǎng)發(fā)育，縮短養(yǎng)殖周期。并具有適應(yīng)性強(qiáng)，能耐受高濃度的有機(jī)廢水和較強(qiáng)的分解轉(zhuǎn)化能力，對(duì)酚、氰等毒物也有一定的耐受和分解能力等特點(diǎn)。 　　 　 　 一、 功能 　　 　　1.凈化水質(zhì)：沼澤紅假單胞菌可降解水體中的有機(jī)物；同時(shí)，還能吸收利用水體中的氨、亞硝酸鹽、硫化氫等有害物質(zhì)。在處理生活污水時(shí)，每天連續(xù)大量在污染水體中投放沼澤紅假單胞菌，消耗大量氮、磷等營(yíng)養(yǎng)因子，會(huì)抑制浮游植物的生長(zhǎng)。 　　 　　2.作為飼料添加劑： 沼澤紅假單胞菌具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，這正是它在 水產(chǎn)養(yǎng)殖 中作為培水餌料及作為飼料添加成分物質(zhì)基礎(chǔ)。 　　 　　3.抑制藍(lán)藻水華：沼澤紅假單胞菌能大量利用水中的某些藍(lán)藻需要的有機(jī)物質(zhì)，和藍(lán)藻形成生物競(jìng)爭(zhēng)，在藍(lán)藻水華產(chǎn)生初期能有效抑制藍(lán)藻數(shù)量。 　　 　　 二． 制備方法 　　 　　生產(chǎn)所需設(shè)備： 　　 　　1、容積60L的白色塑料桶、漏斗、塑料勺（一級(jí)擴(kuò)培）； 　　 　　2、容積1噸的塑料罐，白色半透明為宜（二級(jí)擴(kuò)培）； 　　 　　3、功率不超過(guò)100瓦（一般采用75瓦）的潛水泵； 　　 　　4、容積5L的透明塑料瓶若干。 　　 　　一級(jí)擴(kuò)培：將2瓶紅色5升菌種和2袋500克定向培養(yǎng)基、100克膏狀培養(yǎng)基、1號(hào)瓶黃色液體培養(yǎng)基和90升自來(lái)水或井水混合均勻后再灌裝到20個(gè)5升的透明塑料瓶中，晴天曬5天左右（陰雨天或最高氣溫低于20℃時(shí)間需要延長(zhǎng)，最低氣溫不得低于15度），每天早8時(shí)左右搖動(dòng)一次防止活菌沉淀，即可得到與菌種顏色和濃度一致的一級(jí)菌種。 　　 　　二級(jí)擴(kuò)培：將得到的20瓶一級(jí)菌種、2袋5kg定向培養(yǎng)基、1kg膏狀培養(yǎng)基、2號(hào)瓶黃色液體培養(yǎng)基和900升自來(lái)水或井水混合均勻后再灌裝到200個(gè)5升的透明塑料瓶中，晴天曬5天左右（陰雨天氣時(shí)間需要延長(zhǎng)），每天早8時(shí)左右搖動(dòng)一次防止活菌沉淀，即可得到與菌種顏色和濃度一致的成品。 　　 　　注意：高溫季節(jié)正午時(shí)需要在瓶體外覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)和灑水降溫，保證菌液溫度不超過(guò)45度，防止菌種被高溫及強(qiáng)紫外線殺死。 　　 　　罐體內(nèi)部消毒步驟： 　　 　　1、使用增壓水槍沖洗附著物（自來(lái)水或井水）； 　　 　　2、放掉臟水，再次加入自來(lái)水或井水（需要覆蓋出水口上方），加入適量二氧化氯消毒劑，浸泡、熏蒸10-30分鐘（加蓋）； 　　 　　3、放掉消毒水，關(guān)掉出水閥門(mén)，使用自來(lái)水或井水由上至下沖洗罐體，使蓄水量覆蓋出水口上方后全部放掉，完成消毒過(guò)程。 　　 　　4、如果不間斷連續(xù)生產(chǎn)沼澤紅假單胞菌，則期間無(wú)需反復(fù)消毒。 　　 　 　 三、科學(xué)的使用 　　 　　1.用量用法： 　　 　　沼澤紅假單胞菌的最宜使用時(shí)間應(yīng)該盡量在天亮后盡早使用，以最大限度的利用光照，充分發(fā)揮其功能。使用于養(yǎng)殖池塘?xí)r，700ml（按含沼澤紅假單胞菌100億個(gè)/ml的產(chǎn)品計(jì)算）用于1畝水面（不計(jì)水深）；用水稀釋后均勻潑灑。大型水體可以和畜禽糞尿水同時(shí)潑灑。 　　 　　沼澤紅假單胞菌作為飼料添加劑使用時(shí)，可將菌液噴灑于飼料中拌勻即可，菌液用量為投喂飼料量的1-2%，現(xiàn)配現(xiàn)用。 　　 　　2.使用條件： 　　 　　一般來(lái)說(shuō)，水溫達(dá)到15攝氏度或以上，天氣晴朗時(shí)使用最適宜。水體過(guò)肥時(shí)、早中晚水色無(wú)明顯變化的水體、底層水有腥臭味時(shí)、出現(xiàn)藻類(lèi)水華早期癥狀時(shí)，視情況使用1-2次沼澤紅假單胞菌；藍(lán)藻水華爆發(fā)嚴(yán)重的水體在使用沼澤紅假單胞菌的同時(shí)還需要視具體情況配合使用高水溶性的過(guò)磷酸鈣。 　　 　　注意事項(xiàng)：使用沼澤紅假單胞菌的前后三天內(nèi)盡量不要使用消毒劑和殺蟲(chóng)劑
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