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標(biāo)題: 魚粉及烏賊內(nèi)臟粉中硝基呋喃代謝物等現(xiàn)狀調(diào)查 [打印本頁]

作者: 珊瑚海 時間: 2010-6-8 15:57
標(biāo)題: 魚粉及烏賊內(nèi)臟粉中硝基呋喃代謝物等現(xiàn)狀調(diào)查
（轉(zhuǎn)自水產(chǎn)前沿）
吳秀峰，薛敏(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，國家水產(chǎn)飼料安全評價基地，北京，100081)一、背景
1、硝基呋喃類
硝基呋喃類抗生素(nitrofuran antibiotics)主要是指呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃西林(nitrofurazone)、呋喃妥因(furantoin)和呋喃它酮(furaltadone)，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、某些真菌和原蟲均有作用。這類抗生素曾經(jīng)被廣泛用于家禽、家畜、水產(chǎn)、蜂等動物傳染病的預(yù)防與治療，部分品種具有促生長的作用，曾被用作藥物飼料添加劑。硝基呋喃類藥物及其對應(yīng)的代謝產(chǎn)物有呋喃唑酮(AOZ)、呋喃它酮(AMOZ)、呋喃西林(SEM)和呋喃妥因(AHD)。但有關(guān)研究證明，硝基呋喃類藥物及其代謝物具有較強的毒副作用，能誘導(dǎo)有機(jī)體基因突變，有致畸胎的誘導(dǎo)作用，且能誘發(fā)癌癥，因而引起了人們的高度重視。美國和日本分別于1975年、1977年禁止呋喃唑酮作為醫(yī)藥使用。美國1993年禁止呋喃唑酮作為獸藥。歐盟在1995年禁止使用呋喃西林，從1997年開始將所有的硝基呋喃類抗生素全部列為違禁藥物。2004年美國FDA公布了禁止在進(jìn)口動物源性食品中使用的11種藥物名單，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。我國農(nóng)業(yè)部文件農(nóng)牧發(fā)[2002]1號也規(guī)定動物源性食品中呋喃唑酮的檢出限為不得檢出。
呋喃唑酮(AOZ)為硝基呋喃類藥物中最具代表性的一種，以呋喃唑酮(AOZ)為例，動物服用呋喃唑酮后，原藥分子在動物體內(nèi)迅速代謝，其在體內(nèi)的穩(wěn)定性不超過幾小時；代謝的部分化合物分子與細(xì)胞膜蛋白結(jié)合成為結(jié)合態(tài)，結(jié)合態(tài)可長期保持穩(wěn)定，從而延緩原藥在體內(nèi)的清除速度。而普通的食品加工方法( 如燒烤、微波加工、烹調(diào)等)難以使蛋白結(jié)合態(tài)呋喃唑酮殘留物大量降解，食用含有該殘留物的肉制品會對人體產(chǎn)生一定的毒副作用。研究表明：蛋白結(jié)合態(tài)的呋喃唑酮殘留物含有稱為3-氨基-2-唑酮(AOZ)的完整側(cè)鏈，在人和動物胃的酸性條件下，側(cè)鏈可以從蛋白結(jié)合態(tài)的母體分子上解離下來，AOZ可以代謝成為β-羥乙基肼，該代謝物是強致突變和致癌化合物。同樣硝基呋喃類物質(zhì)的其他代謝物AMOZ、SEM、AHD等都能在體內(nèi)與細(xì)胞膜蛋白結(jié)合形成穩(wěn)定的結(jié)合態(tài)長期存在，對人體產(chǎn)生毒副作用。徐維海（2005）在羅非魚肌肉中呋喃唑酮和AOZ的含量分別在停藥6 小時后和停藥“零時”達(dá)到最高，24 小時后呋喃唑酮含量就低于檢出限，而肌肉中AOZ的含量在528 小時后才低于1μg/ kg，肌肉中呋喃唑酮和AOZ的消除半衰期分別為9134小時、3812 小時，這表明魚肌肉中呋喃唑酮代謝很快，而AOZ卻很難消除。
蔣原等（2008）用10μg/mL濃度的硝基呋喃類藥物溶液浸泡克氏螯蝦給藥1小時，然后在不同時間段采樣，運用HPLC /MS/MS檢測和分析硝基呋喃類藥物代謝物在克氏螯蝦肌肉、腮和肝胰腺中的消除規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn)硝基呋喃類藥物的代謝物在克氏螯蝦鰓中藥物起始濃度最高，其次是肝胰腺，最后是蝦肉。克氏螯蝦體內(nèi)的4種硝基呋喃類藥物代謝物，在2-4 小時下降速度最快，4 小時以后下降速度呈減緩的趨勢。經(jīng)過336 小時后，該類藥物濃度降低到儀器檢測低限以下。結(jié)果提示，一旦克氏螯蝦被硝基呋喃類藥物污染，很難在短時間內(nèi)消除，增加了產(chǎn)品出口時的風(fēng)險。
盡管如此，由于硝基呋喃類藥物價格便宜，藥效快，目前也仍有大量養(yǎng)殖戶違禁使用呋喃類物質(zhì)藥物，導(dǎo)致出口的畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品由于呋喃類藥物檢出而就地銷毀的事件屢有發(fā)生。
2、孔雀石綠
孔雀石綠（Malachite green，MG）屬三苯甲烷類染料，化學(xué)名稱四甲基代二氨基三苯甲烷，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中孔雀石綠主要用來抗真菌感染和殺滅寄生蟲，一般用于魚類防治水霉病、爛鰓病以及寄生蟲等。因其價格低廉、療效顯著，曾在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中廣泛應(yīng)用。孔雀石綠進(jìn)入水生動物體內(nèi)后，會快速代謝成脂溶性的無色孔雀石綠(Leucomalachite green，LMG)。但研究發(fā)現(xiàn)：孔雀石綠的化學(xué)官能團(tuán)三苯甲烷是一種致癌物質(zhì)，并能在魚體內(nèi)長時間殘留，可通過食物鏈對哺乳動物和人類產(chǎn)生致畸、致癌、致突變等作用，同時含孔雀石綠的養(yǎng)殖廢水排放會污染水環(huán)境。
孔雀石綠及其代謝物具有潛在的致癌、致畸、致突變的作用，其已被全球大部分國家禁止在養(yǎng)殖業(yè)中的使用。歐盟法案2002/675/EC規(guī)定，動物源性食品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留總量限制為2μg/kg；日本的肯定列表也明確規(guī)定在進(jìn)口水產(chǎn)品中不得檢出孔雀石綠殘留；我國也明確禁止在食用動物中使用孔雀石綠。
Meyer等（1983）的研究結(jié)果表明：用孔雀石綠處理過的虹鱒卵孵化后，能引起魚的頭、尾和鰭條等出現(xiàn)畸形，并導(dǎo)致染色體變異。Srivastava等（1995）闡述了孔雀石綠對鱸（Micropterus salm onides）卵死亡率的影響，孔雀石綠濃度增加2倍，鱸卵和魚苗死亡率增加了20倍。說明孔雀石綠的毒性較強，用于魚卵及魚苗的消毒存在較大的風(fēng)險。Ross等（1985）研究發(fā)現(xiàn)，孔雀石綠還可引起虹鱒呼吸抑制的現(xiàn)象。
孔雀石綠可在魚體組織內(nèi)殘留，主要積累靶器官包括肝、腎、肌肉、皮膚及其它內(nèi)臟組織中。Bauer等（1988）報道，魚暴露于孔雀石綠水溶液后，會很快從水中大量吸收孔雀石綠，并代謝成簡單的無色化合物—無色孔雀石綠，大約90%以無色孔雀石綠的形式貯藏在肌肉組織中。有色孔雀石綠在體內(nèi)消除快，而無色孔雀石綠消除則很慢，在虹鱒魚肌肉中無色孔雀石綠的半衰期在10天到40天范圍內(nèi)變動，其在組織中的消除率很大程度上取決于魚體內(nèi)的脂肪含量。在虹鱒魚苗中，孔雀石綠及其代謝產(chǎn)物總的半衰期是13天。曲志娜等（2008）采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，對用濃度為800ng/ml的孔雀石綠溶液藥浴1h的大菱鲆進(jìn)行連續(xù)采樣監(jiān)測。結(jié)果表明，孔雀石綠在大菱鲆的肌肉中代謝較快，其含量降至檢測限以下需要20.3天，而其代謝物隱色孔雀石綠存留時間長，消除過程緩慢，需長達(dá)281.9-356.7天。
近年來，我國出口的鰻魚等和國內(nèi)市場中的大菱鲆（俗稱“多寶魚”）、鱖魚（桂花魚）等產(chǎn)品中相繼被檢出孔雀石綠殘留，這給水產(chǎn)品市場帶來了很大的沖擊，國外主要水產(chǎn)品進(jìn)口國，借機(jī)對我國出口水產(chǎn)品進(jìn)行限制，暫停進(jìn)口我國淡水產(chǎn)品，包括鰻魚在內(nèi)的淡水產(chǎn)品出口一度停滯，對我國的水產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重影響，水產(chǎn)品中孔雀石綠的殘留問題已成為社會關(guān)注的焦點之一。
二、市場調(diào)查
魚粉的主要原料為海洋捕撈的野生鳀魚，鯡魚，沙丁魚等，原則上不應(yīng)該檢出硝基呋喃類抗生素或孔雀石綠。但由于我國每年魚粉需求量超過100萬噸，市場上流通的魚粉來源和質(zhì)量差異非常大，摻雜現(xiàn)象也比較普遍，特別是以淡水魚魚粉的摻雜很可能造成飼料被硝基呋喃或孔雀石綠污染的現(xiàn)象。此外，烏賊內(nèi)臟粉也是飼料企業(yè)難以品控的一種原料。基于此， 2008年2月-10月中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所國家水產(chǎn)飼料評價基地對國內(nèi)大中型飼料企業(yè)使用的魚粉及烏賊內(nèi)臟粉進(jìn)行隨機(jī)取樣并檢測硝基呋喃代謝物和孔雀石綠，以期對我國市場上不同來源的魚粉及烏賊內(nèi)臟粉的安全現(xiàn)狀進(jìn)行調(diào)查。
三、調(diào)查結(jié)果
2008年，共隨機(jī)抽檢37個樣品。其中魚粉29個，烏賊內(nèi)臟粉7個，蝦糠1個。進(jìn)口魚粉的產(chǎn)地涉及秘魯、巴基斯坦、阿根廷、美國、俄羅斯、智利、越南及馬來西亞等國，國產(chǎn)魚粉的產(chǎn)地主要為山東省、浙江省、河北省和大連市。烏賊內(nèi)臟粉的產(chǎn)地來自日本及我國的浙江省。
由于硝基呋喃類藥物原藥在動物體內(nèi)的穩(wěn)定性只有數(shù)小時，故測定硝基呋喃類原藥意義不大。而其代謝物可與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的殘留物質(zhì)。采用LC-MS/MS法，定量限為：0.5μg/kg。檢測結(jié)果：37個樣品中的硝基呋喃代謝物的檢出率為0。說明目前在我國市場上流通的魚粉產(chǎn)品被硝基呋喃代謝物污染的幾率比較低。
孔雀石綠及其代謝物的測定方法采用GB/T19857-2005，檢出限：0.5μg/kg�？兹甘G及其代謝物的檢出率相對較高。37個樣品中孔雀石綠及其代謝物的檢出率達(dá)到32.4%。最高的1個樣品檢出孔雀石綠70767.6μg/kg和無色孔雀石綠62787.8μg/kg。從檢測結(jié)果可以看出，孔雀石綠及其代謝物出要出現(xiàn)在國產(chǎn)魚粉中，進(jìn)口魚粉中產(chǎn)自越南和智利的2個樣品有微量檢出，可能由流通環(huán)節(jié)中摻雜產(chǎn)生。在烏賊內(nèi)臟粉和蝦糠中未檢出，具體結(jié)果見附表。
四、分析原因及建議
1、原因
魚粉中含有高濃度孔雀石綠的主要原因是摻假。例如在進(jìn)口魚粉中摻雜以水產(chǎn)品加工的副產(chǎn)品加工的淡水魚魚粉可能導(dǎo)致較高的孔雀石綠含量；另一種可能是曾經(jīng)被孔雀石綠污染的池塘、河流及海域?qū)е略摰赜虻奶烊霍~類被孔雀石綠污染，以此為原料進(jìn)行生產(chǎn)的魚粉，含有微量的孔雀石綠，但后者的可能性較低。
2、建議
2002年，我國在水產(chǎn)養(yǎng)殖中禁止使用孔雀石綠。但由于之前較為廣泛地應(yīng)用于水生動物的防病治病中，以及作為工業(yè)性染料，可能在水體、底泥和河流的沉積物中仍然具有相當(dāng)量的孔雀石綠沉積，孔雀石綠在環(huán)境中殘留時間長，對多數(shù)水生動物有較強毒性，對生態(tài)環(huán)境造成了嚴(yán)重的破壞。因此，國內(nèi)不僅要對其檢測方法進(jìn)一步加以改進(jìn)，監(jiān)控環(huán)境中的孔雀石綠含量，而且應(yīng)大力研究從池塘水體中清除孔雀石綠殘留物的方法，并盡快開發(fā)出安全而有效的孔雀石綠替代藥物。
目前飼料企業(yè)對于魚粉的品控多關(guān)注于營養(yǎng)成分，是否摻有非魚粉物質(zhì)，新鮮度等問題。很少有企業(yè)會想到魚粉等水生生物來源原料可能含有一定量的孔雀石綠問題，這也是使得一些涉及到出口的養(yǎng)殖企業(yè)，被測出產(chǎn)品中含有孔雀石綠時，找不到原因所在。由于孔雀石綠的測定方法中需要使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜這樣的大型分析儀器，大多數(shù)飼料企業(yè)沒有能力配備。而委托檢測機(jī)構(gòu)測定的檢測費用又很高，飼料企業(yè)很難保證批批測定。對于使用國產(chǎn)魚粉的飼料企業(yè)，建議根據(jù)實際情況，適當(dāng)抽檢孔雀石綠為宜。
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作者: 蘇老師 時間: 2011-8-26 15:58
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